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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 抗体/Elisa » ELISA试验不显色，希望得到大家帮助
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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wxy3937

金虫 (正式写手)
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7楼: Originally posted by 张易120 at 2014-09-01 19:20:48
标准蛋白没染出来，如果不是盒子有问题就是操作有问题。洗是洗不掉的，盒子有没有失效？我仔细找了，当时没拍下说明书的照片，我记得当时全程是在37℃摇床上进行的，一天搞定96孔板的，建议楼主找到说明书，严格按 ...

一抗二抗孵育也要在摇床吗，我放着没管，下次可能要注意了。
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11楼2014-09-01 20:42:17
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wxy3937

金虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 张易120 at 2014-09-01 19:35:31
怀疑是试剂盒和抗体的问题，经费充足的话你可以考虑订做。我当初做的是老师买来的,，好像一千左右，测了IL-1β和IL-6.
...

谢谢你。
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12楼2014-09-01 20:45:06
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阿Q~~

至尊木虫 (文坛精英)
★ ★ ★ ★ ★
wxy3937: 金币+5, 谢谢支持 2014-09-04 10:41:37
帮顶 ~~~~~~~~~~~~~
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自强不息，厚德载物；独立精神，自由思想。
13楼2014-09-01 20:54:17
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张易120

木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
11楼: Originally posted by wxy3937 at 2014-09-01 20:42:17
一抗二抗孵育也要在摇床吗，我放着没管，下次可能要注意了。...

一抗和二抗就不必在摇床上孵育了吧。对楼主操作中的疑问，双抗体夹心法包埋的应该是一抗，可是楼主包埋的是样品，而且包埋方式存在未说明，包埋是否规范？如何包埋的？

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14楼2014-09-01 21:09:15
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wxy3937

金虫 (正式写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 张易120 at 2014-09-01 20:09:15
一抗和二抗就不必在摇床上孵育了吧。对楼主操作中的疑问，双抗体夹心法包埋的应该是一抗，可是楼主包埋的是样品，而且包埋方式存在未说明，包埋是否规范？如何包埋的？
...

间接法，样品+一抗+二抗，类似于WB
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15楼2014-09-01 21:12:10
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张易120

木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
15楼: Originally posted by wxy3937 at 2014-09-01 21:12:10
间接法，样品+一抗+二抗，类似于WB...

呃，彻底晕了，检测未知抗原那么不是用双夹心法，如果用间接法的话，那要检测的蛋白不成了已知抗原，一抗成了要检测的未知抗体。

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16楼2014-09-01 21:33:57
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张易120

木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
另外楼主包埋的时直接把蛋白加进去，没有PH 9.6下的碳酸盐缓冲液，怎么包埋成功的？

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17楼2014-09-01 21:36:33
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wxy3937

金虫 (正式写手)
引用回帖:
17楼: Originally posted by 张易120 at 2014-09-01 20:36:33
另外楼主包埋的时直接把蛋白加进去，没有PH 9.6下的碳酸盐缓冲液，怎么包埋成功的？

蛋白是碳酸缓冲液稀释的
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18楼2014-09-01 22:32:16
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逍潇

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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6楼: Originally posted by wxy3937 at 2014-09-01 20:13:02
没有用试剂盒...

可能问题：
1. 你制单抗时是用的什么抗原制备的？如果是变性蛋白，那么你做ELISA的样品必须要煮，否则不显色。
2. 高盐缓冲液洗板可能影响显色，用通用的洗涤缓冲液PBST就可以了。
3. 应该用双抗夹心来检测你样品中的目标蛋白。包在板上的样品中目标蛋白含量是很低的。如果你只有一种目标蛋白的抗体，则建议你还是用westernblot来检测，不适合用ELISA。间接ELISA测蛋白定量也不准。
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wxy3937
19楼2014-09-02 08:03:47
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mzhyan

至尊木虫 (文坛精英)
★ ★ ★ ★ ★
wxy3937: 金币+5, 谢谢支持 2014-09-04 10:42:20
blessing
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20楼2014-09-02 08:30:53
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