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wxy3937

金虫 (正式写手)

[交流] ELISA试验不显色,希望得到大家帮助 已有2人参与

1) 样品为鱼肝micorsome,100ul加入ELISA板,每个样品三次重复。
2) 湿盒中,4度冰箱过夜。
3) 200ul 低盐缓冲液洗涤,轻微晃动洗3次每次5分钟
4) 5%脱脂奶粉封闭1小时
5) 200ul 低盐缓冲液洗涤,轻微晃动洗3次每次5分钟
6) 100ul 一抗,室温1.5小时
7) 200ul高盐缓冲液洗涤,轻微晃动洗3次每次5分钟
8) 100ul 二抗,室温1.5小时
9) 200ul高盐缓冲液洗涤,轻微晃动洗3次每次5分钟
10) 100ul TMB/OPD显色 30分钟
11) 1N 硫酸终止反应
TMB和OPD都已经试过了,均不显色,我猜测我试验的问题是蛋白没有煮过。希望大家帮我一下,谢谢。
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wxy3937

金虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
19楼: Originally posted by 逍潇 at 2014-09-02 07:03:47
可能问题:
1. 你制单抗时是用的什么抗原制备的?如果是变性蛋白,那么你做ELISA的样品必须要煮,否则不显色。
2. 高盐缓冲液洗板可能影响显色,用通用的洗涤缓冲液PBST就可以了。
3. 应该用双抗夹心来检测你样 ...

我查了一下,介绍了什么是蛋白变性,但是还是不懂什么是变性蛋白,请您帮忙解释一下。
谢谢,按照你的建议试试煮过并换洗涤缓冲液。
22楼2014-09-02 08:57:53
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张易120

木虫 (职业作家)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
wxy3937: 金币+8, 谢谢你 2014-09-01 21:30:15
本科学渣表示一年前做的Elisa,现在忘得差不多了。有几个疑问,样本提取多少时间了?我前一天提取的样本同样没煮但第二天染出来了。另外样本是否-70度保存?是否因保存不善分解?Elisa盒子不是里边已经加了一抗吗?另外楼主的室温是37度吗?建议楼主严格按照盒子带的说明书操作。(希望楼主多多指教,勿喷)

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-09-01 19:12:56
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逍潇

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
wxy3937: 金币+8, 谢谢你 2014-09-01 21:30:35
你先把试剂盒的说明书贴上来看看。
3楼2014-09-01 19:32:39
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张易120

木虫 (职业作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
同时好奇标准蛋白染出来没?

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2014-09-01 19:55:34
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