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wxy3937

金虫 (正式写手)

[交流] ELISA试验不显色,希望得到大家帮助 已有2人参与

1) 样品为鱼肝micorsome,100ul加入ELISA板,每个样品三次重复。
2) 湿盒中,4度冰箱过夜。
3) 200ul 低盐缓冲液洗涤,轻微晃动洗3次每次5分钟
4) 5%脱脂奶粉封闭1小时
5) 200ul 低盐缓冲液洗涤,轻微晃动洗3次每次5分钟
6) 100ul 一抗,室温1.5小时
7) 200ul高盐缓冲液洗涤,轻微晃动洗3次每次5分钟
8) 100ul 二抗,室温1.5小时
9) 200ul高盐缓冲液洗涤,轻微晃动洗3次每次5分钟
10) 100ul TMB/OPD显色 30分钟
11) 1N 硫酸终止反应
TMB和OPD都已经试过了,均不显色,我猜测我试验的问题是蛋白没有煮过。希望大家帮我一下,谢谢。
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逍潇

铁杆木虫 (著名写手)

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
wxy3937: 金币+8, 谢谢你 2014-09-01 21:30:35
你先把试剂盒的说明书贴上来看看。
3楼2014-09-01 19:32:39
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逍潇

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by wxy3937 at 2014-09-01 20:13:02
没有用试剂盒...

可能问题:
1. 你制单抗时是用的什么抗原制备的?如果是变性蛋白,那么你做ELISA的样品必须要煮,否则不显色。
2. 高盐缓冲液洗板可能影响显色,用通用的洗涤缓冲液PBST就可以了。
3. 应该用双抗夹心来检测你样品中的目标蛋白。包在板上的样品中目标蛋白含量是很低的。如果你只有一种目标蛋白的抗体,则建议你还是用westernblot来检测,不适合用ELISA。间接ELISA测蛋白定量也不准。

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19楼2014-09-02 08:03:47
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