| 查看: 2003 | 回复: 7 | ||
[求助]
ELISA 不显色 急急急
|
|
哎。。。ELISA这么难吗？以前的时候，是空白值太高（0.2左右），现在是所有的孔读值都在0.09左右（空白孔也是），这是闹哪样，哪里都检查了，不知道是哪一步错了？？？ 现在我把步骤写下来了，希望高手解救一次吧！！！ 采用间接ELISA检测抗血清效价。 用pH 9.6, 0.15 mol.L-1的碳酸盐缓冲液将纯化的重组蛋白稀释为8、2、0.5μg·mL -1 , 包被酶标板, 每孔100μL, 4℃包被过夜。次日每孔加入100μL 7%的山羊血清封闭液, 37℃封闭2h后, 用PBST洗涤3次。然后每孔加入400、800、1600、3200倍稀释的羊抗血清100μL, 空白对照为兔抗血清稀释液( BSA+PBS) , 37℃孵育1 h后, 同上洗涤3次。再次每孔加入100μL HRP标记的羊抗人IgG, 37℃孵育30 min后, 同上洗涤3次。接下来每孔加入100μL TMB显色液, 37℃避光反应15 min后, 每孔再加入50μL 硫酸终止液。最后, 在酶标仪上测450 nm下的OD值。 现在是用天根的TMB后，不显色（几乎没有蓝色），后来没有办法，用以前的ELISA试剂盒剩下的TMB，就显色，TMB是新的，没有问题，而且我用二抗加TMB后反应蓝色，这应该是TMB和二抗都没有问题吧？ 现在真不知道是哪里的原因了  |
回复此楼» 猜你喜欢
生物学学硕求调剂
已经有5人回复
-
284求调剂
已经有10人回复
-
一志愿山东大学药学学硕求调剂
已经有4人回复
-
07化学280分求调剂
已经有4人回复
-
298-一志愿中国农业大学-求调剂
已经有12人回复
-
求材料，环境专业调剂
已经有3人回复
-
335求调剂
已经有5人回复
-
求调剂
已经有7人回复
-
一志愿吉大化学322求调剂
已经有4人回复
-
环境学硕288求调剂
已经有8人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- ELISA实验结果求助
已经有7人回复
- 连续做了两边ELISA，为什么会不显色呢？
已经有5人回复
- 茚三酮与甘氨酸不显色怎么回事啊？
已经有6人回复
- Ehrlich试剂显色问题
已经有3人回复
- 双抗体夹心ELISA，阳性孔，样品孔和阴性对照全部不显色，怎么回事
已经有12人回复
- SDS－PAGE银染不显色！
已经有12人回复
- 胶体金诊断试纸T线不显色
已经有15人回复
- 烯烃点板显色的问题
已经有7人回复
- 磷钼酸显色问题
已经有3人回复
- 请教高手解答：请教高手解答：TLC时紫外显色而碘蒸不显色，为什么？
已经有4人回复
- TLC 显色剂求助
已经有6人回复
- 跪求TMB显色液可行的自制方法！！
已经有13人回复
- ELISA TMB显色液怎么配制？我配的怎么一混合就浑浊了？
已经有13人回复
- 10%硫酸-乙醇不显色，还可以尝试哪种通用型显色剂啊？
已经有6人回复
- 爬板时用碘显色的原理是？
已经有13人回复
- 【讨论】请问醛类化合物怎么显色
已经有13人回复
- 【求助】这个化合物在紫外灯下怎么显色？
已经有28人回复
- 【求助】常用显色剂有哪些
已经有9人回复
- 【求助】多元醇跑板用做什么显色剂
已经有9人回复
- 【求助】【求助】硅胶板的硫酸乙醇显色
已经有16人回复
- 【求助】【求助】硫酸乙醇显色
已经有6人回复
- 【求助】问个幼稚的问题，哪些化合物在紫外显色，哪些碘熏显色？
已经有25人回复
- 【求助】谁能给我一份有机显色基团表
已经有15人回复
2楼2014-05-07 17:29:07
3楼2014-05-08 07:27:29
4楼2014-05-08 14:31:50
5楼2014-05-09 09:12:25
|
本帖内容被屏蔽 |
6楼2014-10-23 15:28:04
feiyue122
金虫 (正式写手)
- 应助: 7 (幼儿园)
- 金币: 679.2
- 散金: 25
- 帖子: 497
- 在线: 239.3小时
- 虫号: 341213
- 注册: 2007-04-08
- 专业: 中药抗炎与免疫药理
7楼2015-01-27 10:27:52
tripleflop
铁虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 19.5
- 帖子: 12
- 在线: 19.5小时
- 虫号: 3823541
- 注册: 2015-04-21
- 性别: GG
- 专业: 植物生理与生化
8楼2015-08-27 09:52:55
