24小时热门版块排行榜    

查看: 1645  |  回复: 9

miaoshuang

银虫 (小有名气)

[求助] 荧光定量PCR相关问题 已有1人参与

各位大神:
        在做荧光定量PCR时,,我每个基因的重复数设为4,但4个重复的CT值总是相差太大,这是怎么回事呀?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

努力,勇敢向前走,一切皆有可能
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yzj926521

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-08-31 19:49:44
加样误差大,加样的时候没有混匀
我做3个重复时候保证ct误差小于0.2
2楼2014-08-30 08:39:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bwangel

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-08-31 19:49:48
重复间差距大就是加样的问题,样的多少对结果影响很大的,可能的话最好混合后分装
3楼2014-08-30 14:27:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

令狐少陈

铜虫 (小有名气)

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-08-31 19:49:52
你的重复指什么啊,生物学重复还是加样重复?
加样重复的话一般要求Ct相差不超过0.5,如果相差很大,你可以将酶,引物,和水提前预混,再一起加到模版里,减少加样次数引起的误差。用新一点的强,慢慢加,吸进去的样品尽量全部打出来!
如果是生物学重复那就太正常啦!
多多交流,海纳百川
4楼2014-08-30 15:53:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

爬爬大蜗牛

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-08-31 19:49:56
记的把模板和mix或者模板和水混合然后分装,单独一个一个加模板,误差会大4
5楼2014-08-30 16:20:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-08-31 19:50:01
加样不准,技术重复不好
6楼2014-08-31 09:19:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

baoyu166

禁虫 (初入文坛)

感谢参与,应助指数 +1
本帖内容被屏蔽

7楼2014-09-01 10:26:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

double可

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
是先预混体系,加样之后瞬时离心。
早已不承认还有什么神
8楼2014-09-01 12:54:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

miaoshuang

银虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 爬爬大蜗牛 at 2014-08-30 16:20:19
记的把模板和mix或者模板和水混合然后分装,单独一个一个加模板,误差会大4

可不可以把模板、引物、MiX等所有东西混合后再分装?
努力,勇敢向前走,一切皆有可能
9楼2014-09-02 17:22:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wwjcas570

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

除大家说的以上原因外,你看一下溶解曲线,如果不是单一的峰,引物不好,即使加样一样,也会导致重复性不好,其次要避免污染。
10楼2014-09-02 18:10:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 miaoshuang 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +4 Tide man 2026-08-10 4/200 2026-08-11 07:45 by emeraldine
[基金申请] filecode +8 documentary 2026-08-10 8/400 2026-08-10 19:20 by loufangrui
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +10 yufeiwaner 2026-08-09 11/550 2026-08-10 18:47 by yufeiwaner
[基金申请] 关于代码变化问题,想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] 静等基金结果 +5 gjjjzhong 2026-08-10 16/800 2026-08-10 17:19 by Tide man
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +8 家与远方 2026-08-10 11/550 2026-08-10 17:09 by 六两废铜
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +3 majunge000 2026-08-10 3/150 2026-08-10 15:46 by lch2012
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +14 Lanmanbaby 2026-08-09 22/1100 2026-08-10 14:57 by wwncly
[基金申请] 8月时间戳变的,举个手。玩一下,释放压力 +11 archvillain 2026-08-04 13/650 2026-08-10 14:41 by seekfind
[基金申请] 好奇怪的filecode +4 布布和一二 2026-08-08 5/250 2026-08-10 14:20 by 冰心玉壶晴
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +5 yang182083 2026-08-06 7/350 2026-08-08 18:29 by zhanghaozhu
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变,有变的大神么? +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 固定端突然变了,今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] 好消息?这个有何含义??? +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
信息提示
请填处理意见