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danlv

木虫 (小有名气)

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[求助] pET28a和pETDuet两个载体的表达强度，哪个更大？已有1人参与

假设：用pET28a载体单独表达A基因，用pETDuet载体表达A和B基因，两个载体分别在BL21(DE3)中诱导表达。

pET28a-A的表达强度是不是要比pETDuet-A-B中A的表达强度更大呢？

单独比较表达蛋白量的话，pET28a-A的中的A蛋白量与pETDuet-A-B中AB蛋白量之和哪个更大呢？

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1楼 2014-08-27 21:57:49

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alicelchf

木虫 (著名写手)

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gyesang: 金币+5, 鼓励回帖交流！ 2014-08-28 21:28:04
danlv(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-08-28 21:59:38

引用回帖:

5楼: Originally posted by 令狐少陈 at 2014-08-28 11:12:01
why？

一个Promoter可以控制多个蛋白的转录。但是能控制多长要看Promoter的强度，在PKS的基
因中，一个promoter控制十几个蛋白的表达是很正常的。

stop
codon是在翻译这个环节来决定蛋白的终止跟promoter控制的转录是分子生物学中两个不同
的事件。

简单一点说，promoter是负责DNA变成mRNA的，如果如够强的promoter,
使连续3-5个基因发生转录是一点问题都没有的。

比如pET28,
我们在NdeI和XhoI位点克隆一个基因，在基因的后面引入一个SpeI位点，我可以将另一个已
经在pET28的基因用XbaI和SpeI切下来克隆到前一个克隆的SpeI位点上。

这样我就得到了两个基因先后被promoter T7控制。

但是每个基因有自己的RBS(ribosome binding site）和stop Codon,
在翻译的时候核糖体会识别这一头一尾两个位点，表达出两个蛋白。

强度肯定是越排在后面的越弱，但是每个蛋白翻译的速率和半衰期不一样，表达出的量也不
是完全绝对。

当然你也可以每一个蛋白前放一个promoter，最好是不同的，但是如果是同一个promoter，
它们很容易发生重组，造成不稳定。