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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » pET28a和pETDuet两个载体的表达强度，哪个更大？
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danlv

木虫 (小有名气)

[求助] pET28a和pETDuet两个载体的表达强度，哪个更大？ 已有1人参与

假设：用pET28a载体单独表达A基因，用pETDuet载体表达A和B基因，两个载体分别在BL21(DE3)中诱导表达。

pET28a-A的表达强度是不是要比pETDuet-A-B中A的表达强度更大呢？

单独比较表达蛋白量的话，pET28a-A的中的A蛋白量与pETDuet-A-B中AB蛋白量之和哪个更大呢？
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1楼 2014-08-27 21:57:49
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alicelchf

木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
gyesang: 金币+5, 鼓励回帖交流！ 2014-08-28 21:28:04
danlv(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-08-28 21:59:38
引用回帖:
5楼: Originally posted by 令狐少陈 at 2014-08-28 11:12:01
why？

一个Promoter可以控制多个蛋白的转录。但是能控制多长要看Promoter的强度，在PKS的基
因中，一个promoter控制十几个蛋白的表达是很正常的。

stop
codon是在翻译这个环节来决定蛋白的终止跟promoter控制的转录是分子生物学中两个不同
的事件。

简单一点说，promoter是负责DNA变成mRNA的，如果如够强的promoter,
使连续3-5个基因发生转录是一点问题都没有的。

比如pET28,
我们在NdeI和XhoI位点克隆一个基因，在基因的后面引入一个SpeI位点，我可以将另一个已
经在pET28的基因用XbaI和SpeI切下来克隆到前一个克隆的SpeI位点上。

这样我就得到了两个基因先后被promoter T7控制。

但是每个基因有自己的RBS(ribosome binding site）和stop Codon,
在翻译的时候核糖体会识别这一头一尾两个位点，表达出两个蛋白。

强度肯定是越排在后面的越弱，但是每个蛋白翻译的速率和半衰期不一样，表达出的量也不
是完全绝对。

当然你也可以每一个蛋白前放一个promoter，最好是不同的，但是如果是同一个promoter，
它们很容易发生重组，造成不稳定。
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修身、齐家、治国、平天下
7楼2014-08-28 12:17:35
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charles08

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by alicelchf at 2014-08-28 12:16:24
pET28a载体单独表达A基因大于pETDuet载体表达A，这个有文献做对比的
duet双表达是为了研究两种蛋白的相互作用才改造得到的载体。

能否给个文章链接？
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9楼2014-08-30 11:51:08
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令狐少陈

铜虫 (小有名气)
a hard question！
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多多交流，海纳百川
2楼2014-08-27 23:13:29
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danlv

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 令狐少陈 at 2014-08-27 23:13:29
a hard question！

期待ing。。。
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3楼2014-08-28 10:18:05
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bio_sci

捐助贵宾 (正式写手)
★
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很明显28a强度更大

[ 发自小木虫客户端 ]
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4楼2014-08-28 10:55:35
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令狐少陈

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by bio_sci at 2014-08-28 10:55:35
很明显28a强度更大

why？
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多多交流，海纳百川
5楼2014-08-28 11:12:01
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alicelchf

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-08-28 21:27:25
pET28a载体单独表达A基因大于pETDuet载体表达A，这个有文献做对比的
duet双表达是为了研究两种蛋白的相互作用才改造得到的载体。
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修身、齐家、治国、平天下
6楼2014-08-28 12:16:24
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bolysu

禁虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-08-28 21:28:12
本帖内容被屏蔽
8楼2014-08-28 19:40:06
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charles08

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by alicelchf at 2014-08-28 12:17:35
一个Promoter可以控制多个蛋白的转录。但是能控制多长要看Promoter的强度，在PKS的基
因中，一个promoter控制十几个蛋白的表达是很正常的。

stop
codon是在翻译这个环节来决定蛋白的终止跟promoter控制的转录 ...

有文献证明吗？能否给个链接？
本人正在设计这方面实验
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10楼2014-08-30 11:52:26
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