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andyzhengwp

金虫 (小有名气)

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[求助] 关于in-fusion PCR问题已有4人参与

我现在要将一个片段无缝的插入到一个质粒的特定位点中，Clontech的In-Fusion试剂盒已经买了，但是发现它需要将质粒线性化，如果酶切线性化的话将不是无缝连接，会有几个碱基多出来，质粒有太大无法pcr方法线性化。
求助：1，有没有好的方法师质粒不加碱基线性化（酶切之后再PCR，肯定会在以前质粒的基础上多出几个碱基来的）？
2.或者有什么好的方法直接实现将一个片段无缝的插入到一个质粒的特定位点中？

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1楼 2014-08-19 10:53:45

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tubulifera

木虫 (正式写手)

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引用回帖:

10楼: Originally posted by ksws0465326 at 2014-08-20 11:19:16
按正常情况的话，如果序列相同的质粒和线性化条带跑电泳，应该差不多，质粒会稍微慢一点儿，但没做过对比，不清楚，呵呵，一般我跑都是1%的胶100v跑40－50分钟。。5000的marker可以分得很清。还有，单跑质粒的时候 ...

线性化的条带会跑的比较慢些，我做过对照，而且从理论上也能解释的通的。

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