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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 综合其他 » 请教下PCR产物怎么做TA克隆
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muchong5577

金虫 (正式写手)

[求助] 请教下PCR产物怎么做TA克隆 已有2人参与

使用一对引物对一段序列进行PCR，不知道使用的是什么Taq酶，PCR产物可能是平滑末端，请教下用这个PCR产物怎么做TA克隆？普通的Taq酶72度延伸加A尾不需要引物吗？
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1楼 2014-08-14 15:14:19
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peterrjp

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

普通的Taq酶就可以，例如Takara的rTaq
记得要切胶纯化，不提倡过柱纯化。
克隆步骤可参考分子克隆指南或者你用的克隆连接试剂盒说明书
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3楼2014-10-21 14:40:43
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yuanbo934

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
普通的Taq酶都会自动在3端加上A的，（高保真酶是不加A的需要加A反应液，加上A），T载体根据这一特性设计出来的，引物是位于5撇端的所以不用管它是否额外加A的问题。
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2楼2014-08-14 18:45:38
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阿修罗Axuro

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by peterrjp at 2014-10-21 14:40:43
普通的Taq酶就可以，例如Takara的rTaq
记得要切胶纯化，不提倡过柱纯化。
克隆步骤可参考分子克隆指南或者你用的克隆连接试剂盒说明书

我一直用过住纯化，用的axygen的试剂盒，pcr后期条带会拖，弥散，是因为试剂盒的原因吗？
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4楼2015-04-10 14:14:11
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