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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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muchong5577

金虫 (正式写手)

[求助] 请教下PCR产物怎么做TA克隆 已有2人参与

使用一对引物对一段序列进行PCR,不知道使用的是什么Taq酶,PCR产物可能是平滑末端,请教下用这个PCR产物怎么做TA克隆?普通的Taq酶72度延伸加A尾不需要引物吗?
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peterrjp

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

普通的Taq酶就可以,例如Takara的rTaq
记得要切胶纯化,不提倡过柱纯化。
克隆步骤可参考分子克隆指南或者你用的克隆连接试剂盒说明书
3楼2014-10-21 14:40:43
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yuanbo934

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
普通的Taq酶都会自动在3端加上A的,(高保真酶是不加A的需要加A反应液,加上A),T载体根据这一特性设计出来的,引物是位于5撇端的所以不用管它是否额外加A的问题。
2楼2014-08-14 18:45:38
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阿修罗Axuro

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by peterrjp at 2014-10-21 14:40:43
普通的Taq酶就可以,例如Takara的rTaq
记得要切胶纯化,不提倡过柱纯化。
克隆步骤可参考分子克隆指南或者你用的克隆连接试剂盒说明书

我一直用过住纯化,用的axygen的试剂盒,pcr后期条带会拖,弥散,是因为试剂盒的原因吗?
4楼2015-04-10 14:14:11
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