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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » WB和elisa结果不一致
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sophia-yxh

铜虫 (正式写手)

[求助] WB和elisa结果不一致 已有1人参与

目前本人一直在做IFN的融合蛋白，是通过酵母分泌表达所得；以前是用大肠杆菌包涵体表达的，通过复性获得样品，该样品通过ELISA\WB检测，以IFN抗体检测的，均为阳性结果，且做抗病毒实验，其抗病毒活性也和市场销售的IFN在同一个数量级，但是不能达到我们的目标要求，所以选择真核酵母分泌表达，想获得IFN和另一个蛋白A的双重作用；

酵母表达的IFN融合蛋白通过ELISA检测是为阳性的，也是用IFN抗体的，我们是自己包板的；但是WB检测却总是阴性的，我们同时以以前原核表达的作为对照，对照每次WB的结果都很稳定是阳性的，但是酵母分泌表达的却很难做出阳性的，虽然也做出来1-2次，我现在由以下几点担心：
1.IFN从融合蛋白上脱落了；
2. IFN上有一个糖基化位点，是不是在真核中糖基化了，恰好遮住了抗体识别位点；
3.我是通过DAB显色的，是不是显色方式不正确；


请大家帮我讨论讨论，谢谢
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我是来学习的！！
1楼 2014-08-08 11:38:12
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wxy3937

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2014-08-12 14:03:20
ELISA检测的是非变性蛋白质，WB检测的是变性蛋白质，而且干扰素好像是二聚体。

我最近做ELISA，没有煮蛋白，TMB和OPD都试过了，没法显色，不知道什么原因。
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6楼2014-09-01 20:48:41
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bio_sci

捐助贵宾 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
sophia-yxh(kx444555代发): 金币+2, 鼓励交流 2014-08-08 13:51:03
估计是糖基化的原因，表位被盖住了，你要换个系统

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sophia-yxh
2楼2014-08-08 13:13:10
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jeangong
祝福祝福祝福！！！祝福祝福祝福！！！祝福祝福祝福！！！祝福祝福祝福！！！祝福祝福祝福！！！
3楼2014-08-08 13:35:35
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sophia-yxh

铜虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by bio_sci at 2014-08-08 13:13:10
估计是糖基化的原因，表位被盖住了，你要换个系统

要是表位被遮盖了，为什么elisa可以显色呢？难道是蛋白的在变性后其位点才被遮住的吗？
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我是来学习的！！
4楼2014-08-11 19:09:52
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