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sophia-yxh铜虫 (正式写手)
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[求助]
WB和elisa结果不一致 已有1人参与
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目前本人一直在做IFN的融合蛋白，是通过酵母分泌表达所得；以前是用大肠杆菌包涵体表达的，通过复性获得样品，该样品通过ELISA\WB检测，以IFN抗体检测的，均为阳性结果，且做抗病毒实验，其抗病毒活性也和市场销售的IFN在同一个数量级，但是不能达到我们的目标要求，所以选择真核酵母分泌表达，想获得IFN和另一个蛋白A的双重作用； 酵母表达的IFN融合蛋白通过ELISA检测是为阳性的，也是用IFN抗体的，我们是自己包板的；但是WB检测却总是阴性的，我们同时以以前原核表达的作为对照，对照每次WB的结果都很稳定是阳性的，但是酵母分泌表达的却很难做出阳性的，虽然也做出来1-2次，我现在由以下几点担心： 1.IFN从融合蛋白上脱落了； 2. IFN上有一个糖基化位点，是不是在真核中糖基化了，恰好遮住了抗体识别位点； 3.我是通过DAB显色的，是不是显色方式不正确； 请大家帮我讨论讨论，谢谢 |
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| 祝福祝福祝福！！！祝福祝福祝福！！！祝福祝福祝福！！！祝福祝福祝福！！！祝福祝福祝福！！！ |
3楼2014-08-08 13:35:35
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
sophia-yxh(kx444555代发): 金币+2, 鼓励交流 2014-08-08 13:51:03
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
sophia-yxh(kx444555代发): 金币+2, 鼓励交流 2014-08-08 13:51:03
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估计是糖基化的原因，表位被盖住了，你要换个系统 [ 发自小木虫客户端 ] |
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sophia-yxh2楼2014-08-08 13:13:10
sophia-yxh
铜虫 (正式写手)
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