| 查看: 2053 | 回复: 5 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
sophia-yxh铜虫 (正式写手)
|
[求助]
WB和elisa结果不一致 已有1人参与
|
|
|
目前本人一直在做IFN的融合蛋白，是通过酵母分泌表达所得；以前是用大肠杆菌包涵体表达的，通过复性获得样品，该样品通过ELISA\WB检测，以IFN抗体检测的，均为阳性结果，且做抗病毒实验，其抗病毒活性也和市场销售的IFN在同一个数量级，但是不能达到我们的目标要求，所以选择真核酵母分泌表达，想获得IFN和另一个蛋白A的双重作用； 酵母表达的IFN融合蛋白通过ELISA检测是为阳性的，也是用IFN抗体的，我们是自己包板的；但是WB检测却总是阴性的，我们同时以以前原核表达的作为对照，对照每次WB的结果都很稳定是阳性的，但是酵母分泌表达的却很难做出阳性的，虽然也做出来1-2次，我现在由以下几点担心： 1.IFN从融合蛋白上脱落了； 2. IFN上有一个糖基化位点，是不是在真核中糖基化了，恰好遮住了抗体识别位点； 3.我是通过DAB显色的，是不是显色方式不正确； 请大家帮我讨论讨论，谢谢 |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有170人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 测得序列基因已导入大肠杆菌，为什么诱导后产生的蛋白与所求蛋白不一致？
已经有10人回复
- WB上样时，样品稀释问题
已经有6人回复
- 求助关于WB的内参问题
已经有3人回复
- 连续做了两边ELISA，为什么会不显色呢？
已经有5人回复
- WB上样量不同导致结果不同，哪一次的结果可信呢？
已经有6人回复
- 半定量 内参条带不一致
已经有4人回复
- 这样的数据怎么比较差异呢
已经有7人回复
- WB结果杂不出目的条带，只有特别亮的非特异性条带，求高手解释原因
已经有10人回复
- 急！待毕业！使用ELISA检测血清中抗体滴度，包被时的抗原可以不与载体蛋白偶联吗？
已经有14人回复
- WB条带总是不太整齐
已经有6人回复
- WB的蛋白总量，变还是不变！？
已经有6人回复
- 本人想做GUS基因的定量表达，有荧光法和ELISA好像比较合适，但是不知选哪一种好？
已经有4人回复
- 双抗体夹心ELISA，阳性孔，样品孔和阴性对照全部不显色，怎么回事
已经有12人回复
- WB上样时样品往上漂溢出孔外，电泳后考马斯亮蓝染色条带特别浅几乎看不到。
已经有4人回复
- mRNA水平和蛋白水平不一致如何解释
已经有20人回复
- 酶标仪测BSA浓度的方法，不用ELISA法，能经过280nm测量吗？
已经有10人回复
- 两次QPCR前后目的基因的CT值不一样
已经有6人回复
- WB结果不理想，呼唤帮助
已经有20人回复
- 【求助/交流】wb时β-actin加完发光液不发光？
已经有4人回复
- 【求助】WB中，核蛋白内参和总蛋白内参的问题
已经有12人回复
- 【求助/交流】WB老做不出来
已经有6人回复
jurkat.1640
至尊木虫 (文坛精英)
- MolEPI: 1
- 应助: 908 (博后)
- 金币: 17148.7
- 散金: 1654
- 红花: 121
- 沙发: 41
- 帖子: 14518
- 在线: 2183.8小时
- 虫号: 514340
- 注册: 2008-02-28
- 性别: GG
- 专业: 病毒学
5楼2014-08-12 15:03:20
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
sophia-yxh(kx444555代发): 金币+2, 鼓励交流 2014-08-08 13:51:03
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
sophia-yxh(kx444555代发): 金币+2, 鼓励交流 2014-08-08 13:51:03
|
估计是糖基化的原因，表位被盖住了，你要换个系统 [ 发自小木虫客户端 ] |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
sophia-yxh2楼2014-08-08 13:13:10
| 祝福祝福祝福！！！祝福祝福祝福！！！祝福祝福祝福！！！祝福祝福祝福！！！祝福祝福祝福！！！ |
3楼2014-08-08 13:35:35
sophia-yxh
铜虫 (正式写手)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 329.2
- 散金: 488
- 红花: 10
- 帖子: 528
- 在线: 245.2小时
- 虫号: 1358919
- 注册: 2011-08-02
- 性别: MM
- 专业: 药理学其他科学问题
4楼2014-08-11 19:09:52
