应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » DEAE-Sepharose Fast Flow column纯化问题，求高手指教
51/1返回列表
查看: 3338  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

sunday1234

新虫 (小有名气)

[求助] DEAE-Sepharose Fast Flow column纯化问题，求高手指教 已有3人参与

我要纯化的蛋白等电点为5.9，用DEAE-Sepharose Fast Flow column纯化，用PBS还是tris缓冲液，缓冲液PH为多少合适，用不同浓度NaCl洗脱时，怎么知道目的蛋白什么时候被洗脱下来？我是新手，求指教？
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

层析纯化

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-07-28 22:54:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liaohongjun

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

一般阴离子交换层析是不选用PB或者PBS缓冲液的，因为磷酸缓冲液能与阴离子交换介质发生反应！至于上样pH，弱阴离子交换层析，在不含盐的情况下，一般高于pI一个pH左右就OK了，但要考虑到你杂蛋白的水平，一切都要以纯化表来评估！
赞一下 回复此楼
10楼2016-11-15 16:28:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

wolfman840

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一般来说，比蛋白等电点高0.5~1个pH的缓冲液即可，但是你的等电点低于7.0，还是建议你用强阴离子交换，比如Q来结合蛋白。
缓冲液用tris-HCl比较理想，你可以在实验时先进行一次20个柱体积的线性梯度洗脱，每1个柱体积收集一管样品，做活性检测，就知道你的蛋白什么离子强度下被洗脱了。
赞一下 回复此楼
2楼2014-07-29 08:28:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunday1234

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wolfman840 at 2014-07-29 08:28:12
一般来说，比蛋白等电点高0.5~1个pH的缓冲液即可，但是你的等电点低于7.0，还是建议你用强阴离子交换，比如Q来结合蛋白。
缓冲液用tris-HCl比较理想，你可以在实验时先进行一次20个柱体积的线性梯度洗脱，每1个柱体 ...

谢谢你！是不是阴离子交换柱都是用Tris-HCl缓冲液?
赞一下 回复此楼
3楼2014-07-29 17:58:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunday1234

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wolfman840 at 2014-07-29 08:28:12
一般来说，比蛋白等电点高0.5~1个pH的缓冲液即可，但是你的等电点低于7.0，还是建议你用强阴离子交换，比如Q来结合蛋白。
缓冲液用tris-HCl比较理想，你可以在实验时先进行一次20个柱体积的线性梯度洗脱，每1个柱体 ...

我还有个疑问，查资料说强阴离子对蛋白质活性有影响。使用强或弱阴历交换时如何界定的呢，ph为多少用强的，为多少用弱的呢
赞一下 回复此楼
4楼2014-07-29 18:33:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭