24小时热门版块排行榜    

查看: 1701  |  回复: 7
本帖产生 1 个 BioEPI ,点击这里进行查看

qazwsx1893

新虫 (初入文坛)

[求助] DEAE FAST FLOW使用有关问题

1.DEAE FAST FLOW经过不同盐浓度洗脱后,在用初始缓冲液平衡柱子过程中,缓冲液的体积和平衡时间与什么有关?我要的蛋白等电点是4.5,用的是PH7.5的20mMTris-HCl缓冲液平衡,而且我用的是5ML的预装柱,洗脱后平衡得需要大约120ML的缓冲液,我看说明书写的只需5-6个柱体积,这是为什么呢?
2.如果自己装的DEAE FAST FLOW柱子流速不稳,时快时慢是什么原因?刚刚重装完,而且没用过几回
3.预装柱如果堵了,怎么办呢?
谢谢!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wlt728

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
silicare(金币+2, EPI+1): 2011-05-16 12:01:11
1,一般平衡的时候,是需要多冲洗几个柱体积的,我觉得为的是让你柱内的环境都是平衡液。
2,我觉得自己装的柱子,柱效肯定没有预装柱好,时快时慢,是你的样品没弄好,你可以上柱子之前过滤一下,这样影响就小了。
3,预装柱堵了,那你就用0.5M的碱试试。
I am not a hero , but I served with heroes!
2楼2011-05-16 10:17:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lihuan0525

金虫 (职业作家)

★ ★ ★ ★ ★
silicare(金币+5): 鼓励新虫发帖交流,欢迎常来生物综合版 2011-05-16 12:01:21
堵了可以反冲试试
应该是浓度,说明书上的只是理论上的,和实际肯定有出入的。
自己装的可能是有断层
3楼2011-05-16 10:20:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小新3858

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

平衡一般看紫外吸收是否回到基线
流速不稳可能是柱子没装好,可以重装一下试试
预装柱如果堵得太厉害,可以用异丙醇冲洗
4楼2011-05-16 12:10:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

德克士27

金虫 (小有名气)

实验狂人

【答案】应助回帖

关于第一个问题:我觉得洗脱平衡用120ml,这也太多了吧!我用过20ml的DEAE FF,平衡也只是5个柱体机,我觉得平衡时只要看电导稳定了就可以!
我用我有限的青春等你的回心转意!
5楼2011-05-16 12:20:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qazwsx1893

新虫 (初入文坛)

电导稳定得很快,但这时洗脱液的PH还不到7,而我缓冲液的PH是7.5,差的太多了
6楼2011-05-16 16:12:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qazwsx1893

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by 小新3858 at 2011-05-16 12:10:47:
平衡一般看紫外吸收是否回到基线
流速不稳可能是柱子没装好,可以重装一下试试
预装柱如果堵得太厉害,可以用异丙醇冲洗

请问紫外吸收回到基线是指零吗?
7楼2011-05-16 16:13:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小新3858

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by qazwsx1893 at 2011-05-16 16:13:43:
请问紫外吸收回到基线是指零吗?

至少是5以下吧,紫外也有波动的
有时候也会出现基线升高的情况,一般判断是否回到基线,就看紫外吸收线是不是平了
8楼2011-05-16 18:12:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 学员NDFcwS 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料专硕306英一数二 +5 z1z2z3879 2026-03-16 7/350 2026-03-17 11:07 by 学员h26Tkc
[硕博家园] 深圳大学硕士招生(2026秋,传感器方向,仅录取第一志愿) +4 xujiaoszu 2026-03-11 9/450 2026-03-17 10:29 by xujiaoszu
[论文投稿] 有没有大佬发小论文能带我个二作 +3 增锐漏人 2026-03-17 4/200 2026-03-17 09:26 by xs74101122
[考研] 301求调剂 +3 A_JiXing 2026-03-16 3/150 2026-03-17 08:21 by 无际的草原
[考研] 一志愿,福州大学材料专硕339分求调剂 +3 木子momo青争 2026-03-15 3/150 2026-03-17 07:52 by laoshidan
[考研] 283求调剂 +3 听风就是雨; 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:41 by 热情沙漠
[考研] 东南大学364求调剂 +5 JasonYuiui 2026-03-15 5/250 2026-03-16 21:28 by 木瓜膏
[考研] 085601求调剂 +3 Du.11 2026-03-16 3/150 2026-03-16 20:42 by 无际的草原
[文学芳草园] 伙伴们,祝我生日快乐吧 +17 myrtle 2026-03-10 26/1300 2026-03-16 18:32 by 青橙Ln
[考研] 中科院材料273求调剂 +4 yzydy 2026-03-15 4/200 2026-03-16 15:59 by Gaodh_82
[考研] 085600调剂 +5 漾漾123sun 2026-03-12 6/300 2026-03-16 15:58 by 漾漾123sun
[考研] 材料与化工专硕调剂 +3 heming3743 2026-03-16 3/150 2026-03-16 15:05 by peike
[考研] 机械专硕调剂 +3 笨笨兔子 2026-03-12 3/150 2026-03-15 20:02 by 栗子粥?
[考研] 289求调剂 +4 这么名字咋样 2026-03-14 6/300 2026-03-14 18:58 by userper
[考研] 297一志愿上交085600求调剂 +5 指尖八千里 2026-03-14 5/250 2026-03-14 17:26 by a不易
[考研] 【考研调剂求收留】 +3 Ceciilia 2026-03-11 3/150 2026-03-13 20:18 by JourneyLucky
[考研] 314求调剂 +7 无懈可击的巨人 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:40 by JourneyLucky
[考研] 土木第一志愿276求调剂,科研和技能十分丰富,求新兴方向的导师收留 +3 土木小天才 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:01 by JourneyLucky
[考研] 大连大学化学专业研究生调剂 +3 琪久. 2026-03-10 8/400 2026-03-11 10:02 by 琪久.
[基金申请] 提交后的基金本子,已让学校撤回了,可否换口子提交 +3 dut_pfx 2026-03-10 3/150 2026-03-11 08:38 by kudofaye
信息提示
请填处理意见