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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » DEAE FAST FLOW使用有关问题
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qazwsx1893

新虫 (初入文坛)

[求助] DEAE FAST FLOW使用有关问题

1.DEAE FAST FLOW经过不同盐浓度洗脱后，在用初始缓冲液平衡柱子过程中，缓冲液的体积和平衡时间与什么有关？我要的蛋白等电点是4.5，用的是PH7.5的20mMTris-HCl缓冲液平衡，而且我用的是5ML的预装柱，洗脱后平衡得需要大约120ML的缓冲液，我看说明书写的只需5-6个柱体积，这是为什么呢？
2.如果自己装的DEAE FAST FLOW柱子流速不稳，时快时慢是什么原因？刚刚重装完，而且没用过几回
3.预装柱如果堵了，怎么办呢？
谢谢！
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1楼 2011-05-15 20:00:21
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wlt728

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
silicare(金币+2, EPI+1): 2011-05-16 12:01:11
1，一般平衡的时候，是需要多冲洗几个柱体积的，我觉得为的是让你柱内的环境都是平衡液。
2，我觉得自己装的柱子，柱效肯定没有预装柱好，时快时慢，是你的样品没弄好，你可以上柱子之前过滤一下，这样影响就小了。
3，预装柱堵了，那你就用0.5M的碱试试。
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I am not a hero , but I served with heroes！
2楼2011-05-16 10:17:10
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lihuan0525

金虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★ ★
silicare(金币+5): 鼓励新虫发帖交流，欢迎常来生物综合版 2011-05-16 12:01:21
堵了可以反冲试试
应该是浓度，说明书上的只是理论上的，和实际肯定有出入的。
自己装的可能是有断层
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3楼2011-05-16 10:20:47
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小新3858

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

平衡一般看紫外吸收是否回到基线
流速不稳可能是柱子没装好，可以重装一下试试
预装柱如果堵得太厉害，可以用异丙醇冲洗
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4楼2011-05-16 12:10:47
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德克士27

金虫 (小有名气)

实验狂人

【答案】应助回帖

关于第一个问题：我觉得洗脱平衡用120ml，这也太多了吧！我用过20ml的DEAE FF，平衡也只是5个柱体机，我觉得平衡时只要看电导稳定了就可以！
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我用我有限的青春等你的回心转意！
5楼2011-05-16 12:20:14
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qazwsx1893

新虫 (初入文坛)
电导稳定得很快,但这时洗脱液的PH还不到7，而我缓冲液的PH是7.5，差的太多了
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6楼2011-05-16 16:12:36
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qazwsx1893

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 小新3858 at 2011-05-16 12:10:47:
平衡一般看紫外吸收是否回到基线
流速不稳可能是柱子没装好，可以重装一下试试
预装柱如果堵得太厉害，可以用异丙醇冲洗

请问紫外吸收回到基线是指零吗？
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7楼2011-05-16 16:13:43
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小新3858

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by qazwsx1893 at 2011-05-16 16:13:43:
请问紫外吸收回到基线是指零吗？

至少是5以下吧，紫外也有波动的
有时候也会出现基线升高的情况，一般判断是否回到基线，就看紫外吸收线是不是平了
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8楼2011-05-16 18:12:33
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