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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 天然药物化学 » 【交流】问一个关于凝胶的基础问题
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cddryw

铁虫 (正式写手)

[交流] 【交流】问一个关于凝胶的基础问题

小弟实验室里经常使用TSK-GEL ODS系列凝胶色谱柱细分纯化，但从未使用过葡聚糖凝胶Sephadex此类填料。
很菜的问题，献上金币50枚求解答。
1.TSK-GEL ODS又是凝胶，又是ODS的，到底是怎样一个洗脱机制？
2.TSK-GEL ODS这样的色谱柱虽然和Sephadex是两种东西，但是否肤浅的存在着如同ODS色谱柱和反相硅胶层析柱那样加压柱子和常压填料的关系？
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1楼 2011-01-19 22:54:45
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steveplum

至尊木虫 (知名作家)
★
cddryw(金币+10): 2011-01-20 16:33:55
qinhy(金币+1): 多谢回帖交流，欢迎常来药学版！ 2011-01-20 21:15:53
lz提到的凝胶没有接触过，但是Sephadex（lh-20）倒是很常用

Sephadex（lh-20，还有其他型号，这个比较常用）当使用小极性流动相（氯仿：甲醇=1：1）是只是分子筛原理，除杂，除色带效果叫明显，当然对一些特定的物质如黄酮，分离效果也是非常明显，如果量大且较为单一的话，很可能直接拿到单体
如果使用大极性流动相(甲醇)不仅有分子筛作用还有反相吸附作用，大极性的先出来小极性后出来，如果有必要可以进行梯度洗脱（甲醇：水），我没有试过，但是原则上是可以的
Sephadex（lh-20）总体还是很好用，流动相选择多，三相的氯仿甲醇水我都上过柱
lz最后说的加压常压那点是什么意思啊？
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2楼2011-01-20 12:49:54
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cddryw

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by steveplum at 2011-01-20 12:49:54:
lz提到的凝胶没有接触过，但是Sephadex（lh-20）倒是很常用

Sephadex（lh-20，还有其他型号，这个比较常用）当使用小极性流动相（氯仿：甲醇=1：1）是只是分子筛原理，除杂，除色带效果叫明显，当然对一些特定 ...

加压就是液相仪啊，常压就是柱层析。
因为论坛中很多大侠似乎用的凝胶都是填料.............我没用过，用的都是hplc色谱柱，这是经济上的问题还是说大侠们确实有目的用到诸如Sephadex这类的填料？
小弟初学中，很疑惑。
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3楼2011-01-20 16:33:45
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steveplum

至尊木虫 (知名作家)
引用回帖:
Originally posted by cddryw at 2011-01-20 16:33:45:


加压就是液相仪啊，常压就是柱层析。
因为论坛中很多大侠似乎用的凝胶都是填料.............我没用过，用的都是hplc色谱柱，这是经济上的问题还是说大侠们确实有目的用到诸如Sephadex这类的填料？
小弟初学 ...

当然是有目的的啊老兄

你说的加压就这意思啊，液相那肯定是高压液相了，过层析柱也经常需要加压的啊，我经常用氮气瓶加压，很猛烈的，有些实验室用鱼泵，鱼泵劲儿他笑了，常压用的不多，因为我用的硅胶是薄层硅胶，所以基本都加压，如果是粗一点硅胶可以不加压，但是柱效相对低些

用Sephadex的目的大部分是除杂，tlc板子上的条带一般都有很好的效果，Sephadex虽然比较贵，但是可以多次重复使用，我们这个都用2年了，平时注意保养就可以，不是出于经济上的什么考虑
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4楼2011-01-20 16:52:35
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zcczj

铜虫 (正式写手)
cddryw(金币+1): 2011-04-25 17:35:10
引用回帖:
Originally posted by steveplum at 2011-01-20 16:52:35:
当然是有目的的啊老兄

你说的加压就这意思啊，液相那肯定是高压液相了，过层析柱也经常需要加压的啊，我经常用氮气瓶加压，很猛烈的，有些实验室用鱼泵，鱼泵劲儿他笑了，常压用的不多，因为我用的硅胶是薄 ...

请教大虾，葡聚糖凝胶装柱子怎么样做分级接收？我看有很多人用的是自动接收器，做柱层析需要吗？
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5楼2011-03-18 22:39:29
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steveplum

至尊木虫 (知名作家)
引用回帖:
Originally posted by zcczj at 2011-03-18 22:39:29:
请教大虾，葡聚糖凝胶装柱子怎么样做分级接收？我看有很多人用的是自动接收器，做柱层析需要吗？

过凝胶一般都用自动接收器

柱层析？硅胶柱层析？不用自动接收器，拿瓶子接
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6楼2011-03-19 12:37:51
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zcczj

铜虫 (正式写手)
cddryw(金币+1): 2011-04-25 17:35:00
引用回帖:
Originally posted by steveplum at 2011-03-19 12:37:51:
过凝胶一般都用自动接收器

柱层析？硅胶柱层析？不用自动接收器，拿瓶子接

另外请教，现在用DEAE-纤维素纯化，上玻璃柱，有关填料用量与所上样品的量之间该怎么样处理，还有这种填料装柱前预处理和装柱要求该怎么样。还有怎么样解决洗脱慢这个问题？需要做分级接收吗？谢谢了。
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7楼2011-03-19 20:38:41
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steveplum

至尊木虫 (知名作家)
引用回帖:
Originally posted by zcczj at 2011-03-19 20:38:41:
另外请教，现在用DEAE-纤维素纯化，上玻璃柱，有关填料用量与所上样品的量之间该怎么样处理，还有这种填料装柱前预处理和装柱要求该怎么样。还有怎么样解决洗脱慢这个问题？需要做分级接收吗？谢谢了。

惭愧了，这个俺也莫有接触过
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8楼2011-03-19 22:32:00
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liu200479

木虫 (正式写手)
cddryw(金币+1): 2011-04-25 17:34:51
DEAE-纤维素纯化多糖吧
http://www.docin.com/p-53896285.h这种柱的特点是柱效低分离时间超长，我今本用DEAE-SEPHAROSE FAST FLOW 几个小时就分完了
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9楼2011-04-01 03:14:28
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杨文心

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
1517115楼: Originally posted by liu200479 at 2011-04-01 03:14:28:
DEAE-纤维素纯化多糖吧
http://www.docin.com/p-53896285.h这种柱的特点是柱效低分离时间超长，我今本用DEAE-SEPHAROSE FAST FLOW 几个小时就分完了

朋友你好，请教你个问题，DEAE纤维素柱一般分离多糖时的吸附载量大概多少啊，我要用到DEAE Sepharose fast flow分离多糖，不知道该用多少填料，1ml填料大概能吸附多少糖呢？请不吝赐教，谢谢了！
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10楼2012-03-29 10:11:13
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化学小公主

至尊木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by steveplum at 2011-03-19 12:37:51
过凝胶一般都用自动接收器

柱层析？硅胶柱层析？不用自动接收器，拿瓶子接...

您好高手，我想请问一下，我想用LH-20分离生物碱，请问用内径26.4mm，长度457mm的普通层析柱可以装柱嘛？我平常过硅胶柱的时候一般都用氯仿：甲醇=20:1开始上柱，逐步加大甲醇的比例，这个比例继续过凝胶柱可以吗？谢谢您！！！
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11楼2013-04-07 10:47:03
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