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DEAE FAST FLOW使用有关问题
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qazwsx1893
新虫
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专业: 食品科学基础
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DEAE FAST FLOW使用有关问题
1.DEAE FAST FLOW经过不同盐浓度洗脱后,在用初始缓冲液平衡柱子过程中,缓冲液的体积和平衡时间与什么有关?我要的蛋白等电点是4.5,用的是PH7.5的20mMTris-HCl缓冲液平衡,而且我用的是5ML的预装柱,洗脱后平衡得需要大约120ML的缓冲液,我看说明书写的只需5-6个柱体积,这是为什么呢?
2.如果自己装的DEAE FAST FLOW柱子流速不稳,时快时慢是什么原因?刚刚重装完,而且没用过几回
3.预装柱如果堵了,怎么办呢?
谢谢!
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1楼
2011-05-15 20:00:21
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小新3858
木虫
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引用回帖:
Originally posted by
qazwsx1893
at 2011-05-16 16:13:43:
请问紫外吸收回到基线是指零吗?
至少是5以下吧,紫外也有波动的
有时候也会出现基线升高的情况,一般判断是否回到基线,就看紫外吸收线是不是平了
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8楼
2011-05-16 18:12:33
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wlt728
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★ ★
silicare(金币+2, EPI+1): 2011-05-16 12:01:11
1,一般平衡的时候,是需要多冲洗几个柱体积的,我觉得为的是让你柱内的环境都是平衡液。
2,我觉得自己装的柱子,柱效肯定没有预装柱好,时快时慢,是你的样品没弄好,你可以上柱子之前过滤一下,这样影响就小了。
3,预装柱堵了,那你就用0.5M的碱试试。
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I am not a hero , but I served with heroes!
2楼
2011-05-16 10:17:10
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lihuan0525
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专业: 蛋白质组学
★ ★ ★ ★ ★
silicare(金币+5): 鼓励新虫发帖交流,欢迎常来生物综合版 2011-05-16 12:01:21
堵了可以反冲试试
应该是浓度,说明书上的只是理论上的,和实际肯定有出入的。
自己装的可能是有断层
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3楼
2011-05-16 10:20:47
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小新3858
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注册: 2009-03-12
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专业: 疫苗学
【答案】应助回帖
平衡一般看紫外吸收是否回到基线
流速不稳可能是柱子没装好,可以重装一下试试
预装柱如果堵得太厉害,可以用异丙醇冲洗
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4楼
2011-05-16 12:10:47
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