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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » DEAE-Sepharose Fast Flow column纯化问题，求高手指教
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sunday1234

新虫 (小有名气)

[求助] DEAE-Sepharose Fast Flow column纯化问题，求高手指教 已有3人参与

我要纯化的蛋白等电点为5.9，用DEAE-Sepharose Fast Flow column纯化，用PBS还是tris缓冲液，缓冲液PH为多少合适，用不同浓度NaCl洗脱时，怎么知道目的蛋白什么时候被洗脱下来？我是新手，求指教？
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1楼 2014-07-28 22:54:31
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
弱阴的结合强度比强阴弱，缓冲液只比等电点高0.5-1个pH单位的时候，用弱阴相当于不能结合。

每一步纯化步骤都有可能造成损失，操作过程中有损失，分析样品的时候要取一小部分样品也有损失，跟层析柱结合再被洗脱之后可能会对蛋白质结构有影响也可能会造成损失。但是在一切都等于未知时，首先要确保的是实验能进行，也就是说——使蛋白质被吸附在层析柱中（这个是一切的前提），所以你的首选为强阴，不行才换用弱阴。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
5楼2014-07-30 04:50:40
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