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王小七wq

新虫 (初入文坛)

[求助] 包涵体上镍离子柱纯化后,洗脱收集的液体中目的蛋白不见了 已有4人参与

我的目的蛋白带有his标签,8M尿素溶解包涵体,
纯化时binding buffer:7M Urea,100mM NaH2PO4,100mM Tris ,pH8.0;
Washing buffer:8M Urea,100mM NaH2PO4,100mM Tris ,pH6.3;
Elution buffer:8M Urea,100mM NaH2PO4,100mM Tris ,pH4.5;
结果洗脱收集的液体中没有目的蛋白,连strip buffer(EDTA)后收集的液体也没有。
怎么回事,纯化之前蛋白电泳检测是存在目的蛋白的,但纯化后竟然没蛋白了。求助各位大神了
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Allen206

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
为什么要用酸洗?上样前浓度多少?体积多少?有没有page图?无图无真相,不可能消失,洗脱完后用碱洗一下,还没有就用咪唑梯度洗,绝不可能无影无踪,你既然选择了酸洗就不用加咪唑了,下次记得上传图片,祝好
不想说什么,,,,
5楼2014-07-14 17:07:41
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