应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 双交换筛选问题
101/1返回列表
查看: 1889  |  回复: 9
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

dazhen9527

新虫 (小有名气)

[求助] 双交换筛选问题已有1人参与

小弟将敲出载体电转到细菌中，利用抗性基因首先筛选到单交换菌株，第二次交换利用sacB敏感性筛选基因敲出突变菌株，现在的情况是只能筛选到单交换菌株，第二次交换就都恢复到野生型菌株了，要敲出的基因不是必须基因，请问各位老师有什么良策，不胜感激！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
justdoit
1楼2014-07-09 20:41:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

矜天

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

在中间加一个新的抗性基因

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
2楼2014-07-17 12:44:13
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dazhen9527

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 矜天 at 2014-07-17 12:44:13
在中间加一个新的抗性基因

导师不让插入失活，没办法啊
赞一下 回复此楼
justdoit
3楼2014-07-17 13:09:11
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

矜天

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-07-17 19:54:35
不算插入失活吧，相当于把你的目的基因替换成一个抗性基因

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
4楼2014-07-17 17:36:08
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dazhen9527

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 矜天 at 2014-07-17 17:36:08
不算插入失活吧，相当于把你的目的基因替换成一个抗性基因

一样的道理，导师要无缝敲除的，唉
赞一下 回复此楼
justdoit
5楼2014-07-21 09:52:17
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

矜天

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我之前做的也是这样，全是回到野生型了，可能这个基因比较重要吧，概率应该很小

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
6楼2014-07-21 14:01:03
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dazhen9527

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 矜天 at 2014-07-21 14:01:03
我之前做的也是这样，全是回到野生型了，可能这个基因比较重要吧，概率应该很小

不重要，至少这个领域还没报道有什么重要的作用
赞一下 回复此楼
justdoit
7楼2014-07-22 12:15:49
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

星空蓝色

新虫 (小有名气)
请问你做出双交换的菌了嘛？我得不到第二次重组的菌，用引物扩增什么都没有

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
8楼2017-07-25 20:47:23
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ccf821020

新虫 (小有名气)
你好，问题解决了吗？我现在也遇到问题了，我用的是自杀质粒，单交换获得了，但是双交换死活弄不出。传了10代挑了800多株，只有1株是敏感型，经过验证是回复成了野生型的菌株。双交换敲除菌株这么难敲除吗？
赞一下 回复此楼
9楼2017-09-01 09:42:49
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Tosendanin

禁虫
本帖内容被屏蔽
10楼2023-06-04 23:12:25
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 dazhen9527 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭