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dazhen9527

新虫 (小有名气)

[求助] 双交换筛选问题已有1人参与

小弟将敲出载体电转到细菌中,利用抗性基因首先筛选到单交换菌株,第二次交换利用sacB敏感性筛选基因敲出突变菌株,现在的情况是只能筛选到单交换菌株,第二次交换就都恢复到野生型菌株了,要敲出的基因不是必须基因,请问各位老师有什么良策,不胜感激!
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justdoit
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矜天

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我之前做的也是这样,全是回到野生型了,可能这个基因比较重要吧,概率应该很小

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
6楼2014-07-21 14:01:03
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矜天

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

在中间加一个新的抗性基因

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
2楼2014-07-17 12:44:13
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dazhen9527

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 矜天 at 2014-07-17 12:44:13
在中间加一个新的抗性基因

导师不让插入失活,没办法啊
justdoit
3楼2014-07-17 13:09:11
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矜天

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-07-17 19:54:35
不算插入失活吧,相当于把你的目的基因替换成一个抗性基因

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
4楼2014-07-17 17:36:08
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