| 查看: 1588 | 回复: 7 | ||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||||
monster_zeh金虫 (小有名气)
|
[求助]
怎么确定一种生物中是否有某种酶 已有1人参与
|
|||
|
一种生物中是否有纤维素酶、溶菌酶、脂肪酶等等。 各位大侠，我是新手，请不吝赐教。 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 蛋白质生物学实验经验 |
» 猜你喜欢
材料科学与工程求调剂
已经有8人回复
-
一志愿大连理工大学材料求调剂
已经有3人回复
-
一志愿北化085600材料专硕275|有文章专利｜求调剂
已经有9人回复
-
材料求调剂 一志愿哈工大总分298分，前三科223分
已经有8人回复
-
274求调剂
已经有3人回复
-
合肥区域性重点一本招收调剂
已经有4人回复
-
085600材料与化工调剂
已经有10人回复
-
22408 359分调剂
已经有7人回复
-
抱歉
已经有4人回复
-
085602化工求调剂（331分）
已经有8人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 检测复合微生物菌剂中的酶活，要怎么检测？
已经有3人回复
- 求助酶联免疫的问题
已经有8人回复
- 用什么方法判断某种细菌中是否含有某种酶？
已经有10人回复
- BsaI的酶切位点怎么看？
已经有4人回复
- 鉴定蛋白质是否酶解完全的方法有哪些
已经有6人回复
- 求一个化合物对一种酶的抑制类型
已经有16人回复
- 有没有酶芯片这么一种东西？
已经有6人回复
- 请问各位大侠有知道怎么通过酶学性质分析来判断某一个酶在胞内还是胞外呢，谢啦！！
已经有15人回复
- 我可能发现了一种新奇的生物发光现象
已经有50人回复
- 微生物发酵液中蛋白酶的种类如何界定？
已经有3人回复
- 蛋白质酶解液中如何确定酶解完全
已经有6人回复
- 如何获得一个酶的基因
已经有5人回复
- 生物酶降解污染物中的一个问题
已经有10人回复
- 通过微生物发酵得到一种酶，需要做哪些实验来鉴定是不是新酶？
已经有14人回复
- 酶分子直径的确定
已经有12人回复
- 大家讨论一下生物界中存在的酶（三维空间尺寸）最小的是哪一个
已经有12人回复
- 怎样辨别区分一个酶是组成型还是诱导型？根据什么的？
已经有3人回复
- 不同来源的同一种微生物基因序列是否相同
已经有12人回复
- 不同来源的同一种微生物基因序列是否相同
已经有11人回复
- 酶切质粒时，怎样鉴定质粒是否被切开了啊？
已经有6人回复
- 【求助/交流】如何确定酶联免疫的显色时间
已经有5人回复
- 【求助/交流】原核表达羊基因，cDNA长度约为3kb，基因为一种有活性的酶
已经有15人回复
- 【求助/交流】酶切时间确定？
已经有7人回复
- 【求助/交流】如何确定微生物代谢物的生物合成关键酶
已经有4人回复
- 【求助/交流】新手请教如何对不同物种中某一酶的氨基酸序列进行比对再设计简并引物啊�
已经有10人回复
凌波丽
专家顾问 (知名作家)
-
专家经验: +218 - BioEPI: 11
- 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.044
- 金币: 2118.9
- 散金: 10
- 红花: 208
- 帖子: 5633
- 在线: 571.6小时
- 虫号: 1766465
- 注册: 2012-04-19
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
- 管辖: 生物科学综合
7楼2014-07-09 09:59:25
polypro
木虫 (正式写手)
- 应助: 197 (高中生)
- 金币: 3921.3
- 散金: 160
- 红花: 22
- 帖子: 512
- 在线: 62.6小时
- 虫号: 1809438
- 注册: 2012-05-11
- 性别: GG
- 专业: 理论和计算化学
3楼2014-07-09 09:13:46
monster_zeh
金虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 1583.3
- 散金: 10
- 红花: 1
- 帖子: 293
- 在线: 268.8小时
- 虫号: 1391477
- 注册: 2011-09-05
- 性别: GG
- 专业: 中药药效物质
4楼2014-07-09 09:26:16
凌波丽
专家顾问 (知名作家)
-
专家经验: +218 - BioEPI: 11
- 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.044
- 金币: 2118.9
- 散金: 10
- 红花: 208
- 帖子: 5633
- 在线: 571.6小时
- 虫号: 1766465
- 注册: 2012-04-19
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
- 管辖: 生物科学综合
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
|
样品中的特定的酶是否存在的实验检测方法 I.最简单的一种方法：测定样品中有没有纤维素酶、溶菌酶、脂肪酶等酶的生物活性，如果酶的活性没有被抑制的话，也可以同时用有关的特定的酶的特征的红外、可见光、紫外光光谱、原子光谱分析进行测定，尤其是这些酶有一些象NADH、FADH之类有机小分子辅基或辅酶或者含有有金属离子时，后者用原子光谱分析。 但是以上只是证明样品中可能有纤维素酶、溶菌酶、脂肪酶等酶，有可能存在与它们有同样活性的其他物质，甚至还不一定就是别的同种活性的生物酶。 II。精确的方法（没有查到祥光酶的标准检测试验流程的前提下）：根据纤维素酶、溶菌酶、脂肪酶等酶的相对分子量进行分子筛层析或者其他的纤维素酶、溶菌酶、脂肪酶等酶的标准分离方法，分离出同等分子量的生物大分子，然后测定其生物活性。接着用用有关的特定的酶的特征的红外、可见光、紫外光光谱、原子光谱分析进行测定，尤其是这些酶有一些象NADH、FADH之类有机小分子辅基或辅酶或者含有有金属离子时，后者用原子光谱分析。这样基本上可以知道纤维素酶、溶菌酶、脂肪酶等酶在样品中是否存在了，现在的有关酶试剂的商品说明一般可能查到常用的酶的检测标准，也可以根据有关常用的酶的检测标准，比如特征光谱、MS、HPLC、SDS PAGE电泳等完成检测。 如果完全查不到有关的酶的检测标准，而且检测要求非常精确的做法，那么做法如下： 1.用HPLC或普通分子筛层析根据目的蛋白质的相对分子量进行分离，也可以根据酶的推荐使用的其他分离方法，比如离子交换层析、亲和层析等分离出目的蛋白质，为了更加精确，一般最好在用非HPLC的情况下应该使用HPLC进行一次完整蛋白质的相对分子量鉴定或者用MS做一次分子量鉴定，同时也是鉴定纯度，还可以用特征光谱、溶解法、SDS PAGE、WB等手段鉴定分离的蛋白质的纯度。一般这一步不要用肽谱分析，因为用了样品就损失了，后面检测还要接着做。MS损失样品很少。这步实验也尽量少用SDS PAGE或WB，因为SDS PAGE回收的蛋白质不一定都能复性，WB的蛋白质则损失了，影响后面的酶活性的测定。 2.酶的生物活性的测定。这一步取目的酶的最适反应条件。酶的生物活性的测定不要放在第一步，因为样品所处环境复杂，很可能目的酶的生活活性被抑制，不要第一步对于样品检测生物活性，发现没有就此放弃。严格一些需要测定目的酶的比活性。 3.对于分离生物大分子对于此种生物大分子进行有限酶水解（通常用胰蛋白酶），可以再对于各个水解片段进行MS测定相对分子量；与此同时，用自动测序仪测定N末端和C末端各测定连续的15个氨基酸左右的氨基酸序列，或者对于此种生物大分子进行有限酶水解（水解酶视酶的相对分子量大小而定，不一定用胰蛋白酶，有必要的话可以用两次不同的水解酶有限水解）后，分别对于两个相邻的水解片段分别用自动测序仪测定序列和用MS测定相对分子量（对于同一次有限水解的每一个蛋白质片段只做一次测定，或者测序或者做MS测定相对分子量），如果这些数据都符合数据库中的与目的酶来源及类型完全相同的酶。 分离时目的产物酶时，一般不要根据纤维素酶、溶菌酶、脂肪酶等酶的相对分子量使用SDS PAGE电泳分离目的蛋白质，因为SDS PAGE回收的蛋白质不一定都能复性；也尽量少用SDS PAGE或WB，WB的蛋白质则损失了，这样下一步就不能用生物活性方法测定是否存在目的酶。 有人可能可能认为：根据纤维素酶、溶菌酶、脂肪酶等酶的相对分子量使用SDS PAGE电泳分离目的蛋白质，虽然SDS PAGE回收的蛋白质不一定都能复性，但是可以用没有限水解后，分别测定相邻水解片段的序列和相对分子量之一（对于同一次有限水解的每一个蛋白质片段只做一次测定，或者测序或者做MS测定相对分子量）。实际上SDS PAGE已经使得蛋白质变性，而复性可能也不是完全，可以用CD和红外傅立叶光谱同时检测，折叠状态即使有生活性也可能不是生理状态的构象，因此有限酶水解可能与天然酶不一样，所以分别测定相邻水解片段的序列和相对分子量之一（对于同一次有限水解的每一个蛋白质片段只做一次测定，或者测序或者做MS测定相对分子量）得到的数据可能与数据实际不符，除非有数据库中的数据就是这样获得的。 4.没有条件做第三步实验，则建议用CD、红外傅立叶光谱、荧光光谱、紫外可见光光谱同时检测第一步分离出的产物的特征光谱，同时结合第二步酶活性测定。这些都是阳性结果之后，再用SDS PAGE电泳或WB检测一次，有条件可同时SDS PAGE电泳和WB，没有条件，至少用一次SDS PAGE电泳。 |
5楼2014-07-09 09:51:13
