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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 通过微生物发酵得到一种酶，需要做哪些实验来鉴定是不是新酶？
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kether

新虫 (小有名气)

[求助] 通过微生物发酵得到一种酶，需要做哪些实验来鉴定是不是新酶？

通过微生物发酵得到一种酶，需要做哪些实验来鉴定是不是新酶？
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1楼 2012-01-29 16:57:17
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

humanbeeing

木虫 (著名写手)

城市里的农村人

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857(金币+1): 鼓励交流 2012-03-07 16:29:11
先要纯化出纯品，然后进行氨基酸残基测序，将测得的序列与数据库中的数据进行比对，判断是不是新酶
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如画如歌如酒如笑如我
4楼2012-01-30 08:57:43
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普通回帖

huangjixiang

捐助贵宾 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
scelab(金币+3): 基本上是这样的 2012-01-29 18:28:19
如果知道产生菌的种类和是什么类型的酶，用SDSPAGE看下分子量，用一些实验确定下酶学性质，看看和已报道的是否有差别，如果有明显差别基本可以确定是一种新的酶。
如果想进一步确认，就纯化后测末端氨基酸序列，根据氨基酸序列设计引物，把酶基因PCR出来并测序，根据序列分析是否为新的
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kether
2楼2012-01-29 17:15:40
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
唯一的办法是得到氨基酸序列，其它的都是不确定的东西。
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kether
流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
3楼2012-01-29 18:45:53
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gjs713

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个得要知道基因序列和氨基酸序列才能下定论。方法有两种，通过PCR扩增得到目的片段后进行测序；将酶进行分离纯化，拿到电泳纯的酶进行氨基酸序列测定。
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勤奋、执着、专注，则无坚不破。
5楼2012-01-30 09:43:00
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pph0259

木虫 (正式写手)
都是小朋友，
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6楼2012-01-30 11:15:12
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yellowred255

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
新酶新特征，直接做应用是否与已知酶一样就行了，省实验省事
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没有过不去的坎，没有走不到的路，加油！
7楼2012-02-10 10:14:35
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kether

新虫 (小有名气)
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引用回帖:
楼: Originally posted by huangjixiang at 2012-01-29 17:15:40:
如果知道产生菌的种类和是什么类型的酶，用SDSPAGE看下分子量，用一些实验确定下酶学性质，看看和已报道的是否有差别，如果有明显差别基本可以确定是一种新的酶。
如果想进一步确认，就纯化后测末端氨基酸序列， ...

现在酶已经纯化出来并做了N端测序，但是C端测序的技术目前还不成熟没法做，只能根据N端序列设计出一条引物，怎么能做PCR扩增出整个的酶基因呢？
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8楼2012-03-06 14:15:34
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kether

新虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2012-01-29 18:45:53:
唯一的办法是得到氨基酸序列，其它的都是不确定的东西。

现在酶已经纯化出来并做了N端测序，但是C端测序的技术目前还不成熟没法做，只能根据N端序列设计出一条引物，怎么能做PCR扩增出整个的酶基因呢？
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9楼2012-03-06 14:16:13
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
引用回帖:
9楼: Originally posted by kether at 2012-03-06 14:16:13:
现在酶已经纯化出来并做了N端测序，但是C端测序的技术目前还不成熟没法做，只能根据N端序列设计出一条引物，怎么能做PCR扩增出整个的酶基因呢？

这个实验我还没有做得到，不好意思，请问你在哪个公司测定的，我们上次测不出来。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
10楼2012-03-06 14:59:07
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