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通过微生物发酵得到一种酶,需要做哪些实验来鉴定是不是新酶?
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kether
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通过微生物发酵得到一种酶,需要做哪些实验来鉴定是不是新酶?
通过微生物发酵得到一种酶,需要做哪些实验来鉴定是不是新酶?
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2012-01-29 16:57:17
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kether
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楼
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Originally posted by
huangjixiang
at 2012-01-29 17:15:40:
如果知道产生菌的种类和是什么类型的酶,用SDSPAGE看下分子量,用一些实验确定下酶学性质,看看和已报道的是否有差别,如果有明显差别基本可以确定是一种新的酶。
如果想进一步确认,就纯化后测末端氨基酸序列, ...
现在酶已经纯化出来并做了N端测序,但是C端测序的技术目前还不成熟没法做,只能根据N端序列设计出一条引物,怎么能做PCR扩增出整个的酶基因呢?
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2012-03-06 14:15:34
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huangjixiang
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scelab(金币+3): 基本上是这样的 2012-01-29 18:28:19
如果知道产生菌的种类和是什么类型的酶,用SDSPAGE看下分子量,用一些实验确定下酶学性质,看看和已报道的是否有差别,如果有明显差别基本可以确定是一种新的酶。
如果想进一步确认,就纯化后测末端氨基酸序列,根据氨基酸序列设计引物,把酶基因PCR出来并测序,根据序列分析是否为新的
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kether
2楼
2012-01-29 17:15:40
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唯一的办法是得到氨基酸序列,其它的都是不确定的东西。
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kether
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
3楼
2012-01-29 18:45:53
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zhang8826857(金币+1): 鼓励交流 2012-03-07 16:29:11
先要纯化出纯品,然后进行氨基酸残基测序,将测得的序列与数据库中的数据进行比对,判断是不是新酶
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如画如歌如酒如笑如我
4楼
2012-01-30 08:57:43
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