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meihong1984

铁杆木虫 (正式写手)

[求助] 做过重复批次发酵的虫友看过来

先说说自己的问题:
实验室构建了一个酵母,可以用来发酵木糖生产酒精,虽然产率不是太高,但在摇瓶培养批次发酵过程中木糖可以完全消耗。
但在做重复批次发酵过程中,实验操作为:每12h完成一个批次,保留酵母,倒出70%的发酵液,然后倒入等量新鲜的培养基。问题来了:第一,二个批次可以完全利用木糖,从第三个批次开始,随着实验的进行,残留的木糖越来越多。
大家遇见过这样的问题吗?是如何解决的哪,请赐教!解决了追加重金相送!呵呵
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qwz

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
amisking(金币+3): 鼓励发帖交流。 2011-11-29 18:56:37
meihong1984(金币+2): 谢谢! 2011-12-22 19:38:12
你没有提供培养基的结构,给你提供两个方向,仔细去找,应该能解决的。希望你的重复能超过千次才算成功。
首要考虑酶的流失,细胞的凋亡,倒出部分要把活性酶回收套用,方法很多;
其次,在培养基试剂中和木糖中对酶活终止抑制的因素必须排除,要进行处理后反应,比如重金属积累等等。
2楼2011-11-29 10:15:38
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zhymhbu

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励积极应助! 2011-11-29 18:56:45
meihong1984(金币+2): 谢谢了! 2011-12-22 19:38:35
连续发酵存在菌种活力退化的问题吧。你每次都留下30%。还可能有菌体分泌的有害物在里面。导致菌体生长受阻。而耗糖逐渐降低
微生物学-发酵工程-生化工程-生化与分子生物学-环境毒理学
3楼2011-11-29 18:48:37
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thiophene9859

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


zhang8826857(金币+1): 鼓励交流 2011-11-30 11:13:42
meihong1984(金币+1): 谢谢了! 2011-12-22 19:38:52
构建的酵母,没准是基因丢失,只是一个可能,仅供参考
4楼2011-11-30 09:41:11
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fajiaoTT

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
scelab(金币+2): 谢谢交流 2011-12-01 12:52:51
meihong1984(金币+1): 谢谢了! 2011-12-22 19:39:18
就像催化剂的使用一个道理,酵母也是有使用的周期的,随着循环的增加,一定会降低活性的,而且发酵液中残留的有害物质,如醛类等,每次的补料时间和营养物质也是应该权衡一下的,这样才能找到原因。
不能吃苦,为何做人!
5楼2011-12-01 12:43:21
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fxgowen

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


zhang8826857(金币+1): 鼓励交流 2011-12-15 23:12:16
meihong1984(金币+1): 谢谢了! 2011-12-22 19:39:36
酒精本身对菌体就有毒害作用,如果想用摇瓶做批次的话,建议在无菌条件下降菌体离心收集之后再做,不要留发酵液,否则残留的乙醇对你批次发酵是很不利的,能坚持两批已经算不错的了
6楼2011-12-01 12:55:22
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dasheng1980

铁杆木虫 (知名作家)

大圣

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
zhang8826857(金币+1): 鼓励交流 2011-12-15 23:12:10
meihong1984(金币+2): 谢谢了! 有道理! 2011-12-22 19:40:22
我觉得菌的活力降低是比较可能的,你可以测一下每罐菌量的差异,看是否有减少的现象,至于有毒物质我却认为不一定是主要原因,因为你加入的是70%的新鲜培养基,再就是在传代的过程中有的失去了目的基因,不具备表达目的产物的能力了,所以就不能利用你的底物了。
不专业,仅供参考。
dasheng1980
7楼2011-12-15 22:08:56
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慕枫寒

铁虫 (初入文坛)

LS,目的基因不是重组到酵母染色体上了,应该可以稳定遗传的啊,怎么会丢失了
8楼2011-12-29 14:59:06
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