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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 做过重复批次发酵的虫友看过来
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meihong1984

铁杆木虫 (正式写手)

[求助] 做过重复批次发酵的虫友看过来

先说说自己的问题：
实验室构建了一个酵母，可以用来发酵木糖生产酒精，虽然产率不是太高，但在摇瓶培养批次发酵过程中木糖可以完全消耗。
但在做重复批次发酵过程中，实验操作为：每12h完成一个批次，保留酵母，倒出70%的发酵液，然后倒入等量新鲜的培养基。问题来了：第一，二个批次可以完全利用木糖，从第三个批次开始，随着实验的进行，残留的木糖越来越多。
大家遇见过这样的问题吗？是如何解决的哪，请赐教！解决了追加重金相送！呵呵
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1楼 2011-11-29 09:53:35
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qwz

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
amisking(金币+3): 鼓励发帖交流。 2011-11-29 18:56:37
meihong1984(金币+2): 谢谢！ 2011-12-22 19:38:12
你没有提供培养基的结构，给你提供两个方向，仔细去找，应该能解决的。希望你的重复能超过千次才算成功。
首要考虑酶的流失，细胞的凋亡，倒出部分要把活性酶回收套用，方法很多；
其次，在培养基试剂中和木糖中对酶活终止抑制的因素必须排除，要进行处理后反应，比如重金属积累等等。
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2楼2011-11-29 10:15:38
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zhymhbu

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励积极应助！ 2011-11-29 18:56:45
meihong1984(金币+2): 谢谢了！ 2011-12-22 19:38:35
连续发酵存在菌种活力退化的问题吧。你每次都留下30%。还可能有菌体分泌的有害物在里面。导致菌体生长受阻。而耗糖逐渐降低
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微生物学-发酵工程-生化工程-生化与分子生物学-环境毒理学
3楼2011-11-29 18:48:37
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thiophene9859

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
zhang8826857(金币+1): 鼓励交流 2011-11-30 11:13:42
meihong1984(金币+1): 谢谢了！ 2011-12-22 19:38:52
构建的酵母，没准是基因丢失，只是一个可能，仅供参考
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4楼2011-11-30 09:41:11
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fajiaoTT

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
scelab(金币+2): 谢谢交流 2011-12-01 12:52:51
meihong1984(金币+1): 谢谢了！ 2011-12-22 19:39:18
就像催化剂的使用一个道理，酵母也是有使用的周期的，随着循环的增加，一定会降低活性的，而且发酵液中残留的有害物质，如醛类等，每次的补料时间和营养物质也是应该权衡一下的，这样才能找到原因。
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不能吃苦，为何做人！
5楼2011-12-01 12:43:21
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fxgowen

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
zhang8826857(金币+1): 鼓励交流 2011-12-15 23:12:16
meihong1984(金币+1): 谢谢了！ 2011-12-22 19:39:36
酒精本身对菌体就有毒害作用，如果想用摇瓶做批次的话，建议在无菌条件下降菌体离心收集之后再做，不要留发酵液，否则残留的乙醇对你批次发酵是很不利的，能坚持两批已经算不错的了
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6楼2011-12-01 12:55:22
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dasheng1980

铁杆木虫 (知名作家)

大圣

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857(金币+1): 鼓励交流 2011-12-15 23:12:10
meihong1984(金币+2): 谢谢了！ 有道理！ 2011-12-22 19:40:22
我觉得菌的活力降低是比较可能的，你可以测一下每罐菌量的差异，看是否有减少的现象，至于有毒物质我却认为不一定是主要原因，因为你加入的是70%的新鲜培养基，再就是在传代的过程中有的失去了目的基因，不具备表达目的产物的能力了，所以就不能利用你的底物了。
不专业，仅供参考。
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dasheng1980
7楼2011-12-15 22:08:56
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慕枫寒

铁虫 (初入文坛)
LS，目的基因不是重组到酵母染色体上了，应该可以稳定遗传的啊，怎么会丢失了
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8楼2011-12-29 14:59:06
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