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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 请教为什Western Blot一定要用两种抗体？
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Gloria001

铁杆木虫 (正式写手)

[求助] 请教为什Western Blot一定要用两种抗体？ 已有3人参与

通常Western Blot中都使用两种抗体进行显色，为什么不能用一种呢？例如直接用连接了HRP的抗体检测抗原，然后显色呢？
请高手指点！
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1楼 2014-07-07 09:37:11
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dragon2013

新虫 (初入文坛)
其他人都说了用两种抗体的作用，放大信号。也可以用一种，在目的蛋白中加上生物素标签，利用链霉素亲和的抗体（Streptavidin-HRP）就可以。但会有以一下问题：1.在用脱脂奶粉时会出现一些背景，因为在脱脂奶粉中会有生物素化的成分。2.会出现非特异条带，在提取蛋白中出目的条带外也会出现其他的生物素化的蛋白。
利用链霉素亲和的抗体，主要用于蛋白分离纯化，因为生物素化的蛋白与Streptavidin的作用较强可以使用更为剧烈的条件，例如可以将SDS达到1%洗脱。现在好多研究蛋白相互作用的都使用这种方法。
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7楼2014-07-22 20:09:58
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hkqgeoffrey

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-07-07 13:11:43
Gloria001: 金币+1, ★有帮助 2014-07-08 14:07:06
楼主说到的是两种可行的不同方法，前者是印迹，后者是ELISA的原理方法，但其实都涉及两种抗体的，楼主在查一下资料吧
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兴趣是第一导师，我爱它，因此我毫无疲倦的探索
2楼2014-07-07 10:19:14
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
Gloria001: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-07-08 14:06:34
你说的是可以的啊，可以直接在一抗上做标记，比如HRP或者AP，但是这样做成本很高，相对而言在二抗上做标记，也就标记那么几种
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
3楼2014-07-07 13:12:57
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biotech_zhou

木虫 (著名写手)

待人以诚：专业/专注/专心

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
Gloria001: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-07-08 14:06:46
1.降低成本；2.放大信号，提高检测的灵敏度。
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4楼2014-07-08 11:20:06
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