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bb123456789

金虫 (正式写手)

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[交流] 做western blotting时，抗体稀释倍数对结果影响大吗？

这段时间在做western blotting，样品是各个组织的总蛋白。前两次做一抗分别按1:6000和1:8000稀释的，后两次做用的1:10000.前两次做有结果，只是背景复杂，后两次没结果也看不到任何杂带。请大家帮忙分析分析吧。

第一个泳道是蛋白质marker，最后一个是纯化蛋白，中间是各组织样品。

20131104_213436.jpg

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1楼2013-11-04 21:41:09

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bingdong05

银虫 (正式写手)

应助: 15 (小学生)
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★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-05 11:56:47
bb123456789: 金币+1, 是一抗孵育后多洗几次还是一抗二抗孵育后均多洗几次呢 2013-11-06 09:21:33

影响很大的，稀释倍数过低，背景很重，倍数过高的话一般条带较清晰，以前做的时候我都是按照1：10000稀释（说明书貌似建议6000，具体不记得了哈），楼主可以试着稀释8000左右，多洗涤几次，多洗涤几次，若是背景还是很杂，再放大稀释倍数

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2楼2013-11-05 09:26:45

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w雨过天晴j

新虫 (初入文坛)

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★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

引用回帖:

2楼: Originally posted by bingdong05 at 2013-11-05 09:26:45
影响很大的，稀释倍数过低，背景很重，倍数过高的话一般条带较清晰，以前做的时候我都是按照1：10000稀释（说明书貌似建议6000，具体不记得了哈），楼主可以试着稀释8000左右，多洗涤几次，多洗涤几次，若是背景还是 ...

请问一下，背景很重是什么意思？

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3楼2013-11-05 09:29:18

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