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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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bb123456789

金虫 (正式写手)


[交流] 做western blotting时,抗体稀释倍数对结果影响大吗?

这段时间在做western blotting,样品是各个组织的总蛋白。前两次做一抗分别按1:6000和1:8000稀释的,后两次做用的1:10000.前两次做有结果,只是背景复杂,后两次没结果也看不到任何杂带。请大家帮忙分析分析吧。

第一个泳道是蛋白质marker,最后一个是纯化蛋白,中间是各组织样品。
做western blotting时,抗体稀释倍数对结果影响大吗?
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做western blotting时,抗体稀释倍数对结果影响大吗?-1
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bingdong05

银虫 (正式写手)


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gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-11-05 11:56:47
bb123456789: 金币+1, 是一抗孵育后多洗几次还是一抗二抗孵育后均多洗几次呢 2013-11-06 09:21:33
影响很大的,稀释倍数过低,背景很重,倍数过高的话一般条带较清晰,以前做的时候我都是按照1:10000稀释(说明书貌似建议6000,具体不记得了哈),楼主可以试着稀释8000左右,多洗涤几次,多洗涤几次,若是背景还是很杂,再放大稀释倍数
2楼2013-11-05 09:26:45
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w雨过天晴j

新虫 (初入文坛)



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引用回帖:
2楼: Originally posted by bingdong05 at 2013-11-05 09:26:45
影响很大的,稀释倍数过低,背景很重,倍数过高的话一般条带较清晰,以前做的时候我都是按照1:10000稀释(说明书貌似建议6000,具体不记得了哈),楼主可以试着稀释8000左右,多洗涤几次,多洗涤几次,若是背景还是 ...

请问一下,背景很重是什么意思?
3楼2013-11-05 09:29:18
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)


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bb123456789: 金币+1, 非常感谢 2013-11-06 09:22:35
可能你的目标蛋白的丰度不是很高,所以组织样品没有信号。但能测到纯化蛋白的信号,说明抗体工作,最好增加样品上样量并稀释纯化蛋白。一抗的稀释倍数当然比较重要,你的情况应该适当减少稀释倍数。
4楼2013-11-05 09:31:29
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bingdong05

银虫 (正式写手)


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bb123456789: 金币+1 2013-11-06 09:34:17
引用回帖:
3楼: Originally posted by w雨过天晴j at 2013-11-05 09:29:18
请问一下,背景很重是什么意思?...

杂带很多,另外,三楼兄弟的提议你也要注意哈
5楼2013-11-05 09:33:21
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bb123456789

金虫 (正式写手)


引用回帖:
3楼: Originally posted by w雨过天晴j at 2013-11-05 09:29:18
请问一下,背景很重是什么意思?...

就像第一张片子,带型模糊有杂带
6楼2013-11-06 09:34:56
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简牧风爱

新虫 (初入文坛)



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你要考虑抗体可检测的范围
7楼2014-07-12 19:18:08
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