应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 生物材料 » 生物效应评价 » [真诚求助] 免疫荧光染内皮细胞的Vinculin方法 (Focal Adhesion component)
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
91/1返回列表
查看: 1790  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

dingyonghui

铜虫 (小有名气)

[求助] [真诚求助] 免疫荧光染内皮细胞的Vinculin方法 (Focal Adhesion component)

RT, 本人初次做细胞实验，Ti经过改性的sample，进行内皮细胞培养后，想通过染色看细胞在样品表面粘附的情况，染Vinculin看Focal Adhesion 的分布，买了一抗是Anti-Vinculin antibody (Mouse monoclonal); 二抗是Goat polyclonal Secondary Antibody to Mouse IgG-H&L(FITC); 问题如下：
（1）染Vinculin用不用Triton X-100 破膜？判断标准是什么？
（2）一抗和二抗分别用什么来稀释啊？网上查了很多，有说用blocking solution （1%BSA/PBS），有的说直接PBS，有的说一抗和二抗不一样, 非常的困惑，恳求高手指点啊！！！
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

Biological

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
Biomaterials
1楼 2012-08-10 00:15:38
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liubin

专家顾问 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
markar: 金币+1, 感谢回帖交流！ 2012-08-13 12:46:24
对照试剂盒，一步一步的做就可以了。
赞一下 回复此楼
2楼2012-08-12 16:42:53
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dingyonghui

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by liubin at 2012-08-12 16:42:53
对照试剂盒，一步一步的做就可以了。

谢谢回复！关键的问题就是试剂盒并没有给出具体详细的信息，只给出了推荐的working concentration range以及染色时间，并未说明用什么来dilute 一抗和二抗~~ 继续求助啊！
赞一下 回复此楼
Biomaterials
3楼2012-08-12 17:04:18
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liubin

专家顾问 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
markar: 金币+1, 感谢回帖交流 2012-08-13 12:46:33
亲，你去做个SEM 吧。
赞一下 回复此楼
4楼2012-08-12 17:08:52
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liubin

专家顾问 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
markar: 金币+1, 感谢回帖交流 2012-08-13 12:46:42
这就是 VEC 在材料上粘附的SEM 图片
赞一下 回复此楼
5楼2012-08-12 17:19:40
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dingyonghui

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by liubin at 2012-08-12 17:08:52
亲，你去做个SEM 吧。

老大 这完全不一码事好不好 SEM能看到分辨出Focal Adhesion么
赞一下 回复此楼
Biomaterials
6楼2012-08-12 18:21:52
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liubin

专家顾问 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
mwyuer: 金币+2, 专家考核, 感谢回帖交流 2012-08-12 20:24:10
这个，看粘附斑，我确实有点不懂。
不破碎细胞吧，应该看不见粘附斑
破碎细胞吧，你如何保障你所检测的蛋白分子还在材料上而没有被洗脱掉？
可能还不仅是破膜的问题，
这个实验偶没有做过。
不过一抗与蛋白分子的接合是关键。
你这个试剂盒偶没有用过，按所提供的范围，你按最大剂量加吧。
顺便问一下？啥玩意儿试剂盒哦，使用方法咋这么不详细？
赞一下 回复此楼
7楼2012-08-12 18:55:13
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jialong-dt

金虫 (正式写手)

突破者

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
mwyuer: 金币+1, 感谢回帖交流 2012-08-13 08:16:26
细胞膜蛋白染色：破坏细胞膜与否对结果影响不大，若要破坏，时间短些效果好点，切记时间勿超过10min；
抗体稀释：一般一抗使用1%的BSA封闭液比较合适；二抗PBS或者封闭液都可以使用。
赞一下 回复此楼
不停的学习，只因为原来荒废了太多时间
8楼2012-08-12 20:55:03
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dingyonghui

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by jialong-dt at 2012-08-12 20:55:03
细胞膜蛋白染色：破坏细胞膜与否对结果影响不大，若要破坏，时间短些效果好点，切记时间勿超过10min；
抗体稀释：一般一抗使用1%的BSA封闭液比较合适；二抗PBS或者封闭液都可以使用。

多谢 我已搞定 实际操作和你说的一样
赞一下 回复此楼
Biomaterials
9楼2012-08-24 20:07:52
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 dingyonghui 的主题更新
91/1返回列表
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 266调剂 +8 daya sun 2026-04-07 9/450 2026-04-08 20:27 by yutian743
[考研] 085501机械英二77总分294求调剂，接受跨专业学习 +3 守法公民亓纪 2026-04-08 3/150 2026-04-08 20:05 by 木鱼.
[考研] 085404，334分，求调剂 +3 sunjie8888 2026-04-08 3/150 2026-04-08 19:37 by Evan_Liu
[考研] 化学调剂求助 +12 LULONG1 2026-04-03 14/700 2026-04-08 19:24 by 我减肥1
[考研] 材料专硕322分 +12 哈哈哈吼吼吼哈 2026-04-02 12/600 2026-04-08 11:43 by 1753564080
[考研] 0703总分331求调剂 +17 ZY-05 2026-04-04 21/1050 2026-04-08 10:16 by screening
[考研] 生物工程求调剂 +13 喜欢还是不甘心 2026-04-05 13/650 2026-04-07 16:55 by Ecowxq666！
[考研] 学硕化学工程与技术，一志愿中国海洋大学320+求调剂 +9 披星河 2026-04-02 9/450 2026-04-07 12:53 by 尽舜尧1
[考研] 生物与医药求调剂 +7 heguanhua 2026-04-05 8/400 2026-04-06 18:41 by macy2011
[考研] 求调剂 +7 张.1 2026-04-05 7/350 2026-04-05 20:40 by 啵啵啵0119
[考研] 288求调剂 一志愿哈工大 材料与化工 +13 洛神哥哥 2026-04-03 13/650 2026-04-05 17:27 by zzx2138
[考研] 344材料与化工调剂 +9 调剂上岸玘 2026-04-03 9/450 2026-04-04 23:10 by happyddm
[考研] 316求调剂 +9 墨辰_Orion926 2026-04-04 9/450 2026-04-04 21:35 by lbsjt
[考研] 总分328生物与医药考数学求调剂 +7 aaadim 2026-04-02 9/450 2026-04-03 22:53 by syh9288
[考研] 调剂 +5 asdasdassda 2026-04-03 6/300 2026-04-03 20:27 by 岸上的一条鱼
[考研] 初试成绩337找调剂 +3 ??? ?. ? 2026-04-03 3/150 2026-04-03 11:43 by 土木硕士招生
[考研] 338求调剂，一志愿能源动力，外语是日语203 +5 zzz，，r 2026-04-02 5/250 2026-04-03 09:45 by 蓝云思雨
[考研] 调剂 +3 osbbx 2026-04-02 3/150 2026-04-03 07:47 by cc8418
[考研] 化学070300-总分378-求调剂 +5 挪椅子的泡泡糖 2026-04-02 5/250 2026-04-02 22:20 by ZXlzxl0425
[考研] 346求调剂 +5 郑诚乐 2026-04-02 5/250 2026-04-02 16:38 by SZW_UJN
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭