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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 生物材料 » 生物效应评价 » [真诚求助] 免疫荧光染内皮细胞的Vinculin方法 (Focal Adhesion component)
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dingyonghui

铜虫 (小有名气)

[求助] [真诚求助] 免疫荧光染内皮细胞的Vinculin方法 (Focal Adhesion component)

RT, 本人初次做细胞实验，Ti经过改性的sample，进行内皮细胞培养后，想通过染色看细胞在样品表面粘附的情况，染Vinculin看Focal Adhesion 的分布，买了一抗是Anti-Vinculin antibody (Mouse monoclonal); 二抗是Goat polyclonal Secondary Antibody to Mouse IgG-H&L(FITC); 问题如下：
（1）染Vinculin用不用Triton X-100 破膜？判断标准是什么？
（2）一抗和二抗分别用什么来稀释啊？网上查了很多，有说用blocking solution （1%BSA/PBS），有的说直接PBS，有的说一抗和二抗不一样, 非常的困惑，恳求高手指点啊！！！
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Biomaterials
1楼2012-08-10 00:15:38
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dingyonghui

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by liubin at 2012-08-12 16:42:53
对照试剂盒，一步一步的做就可以了。

谢谢回复！关键的问题就是试剂盒并没有给出具体详细的信息，只给出了推荐的working concentration range以及染色时间，并未说明用什么来dilute 一抗和二抗~~ 继续求助啊！
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Biomaterials
3楼2012-08-12 17:04:18
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liubin

专家顾问 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
markar: 金币+1, 感谢回帖交流！ 2012-08-13 12:46:24
对照试剂盒，一步一步的做就可以了。
赞一下 回复此楼
2楼2012-08-12 16:42:53
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liubin

专家顾问 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
markar: 金币+1, 感谢回帖交流 2012-08-13 12:46:33
亲，你去做个SEM 吧。
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4楼2012-08-12 17:08:52
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liubin

专家顾问 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
markar: 金币+1, 感谢回帖交流 2012-08-13 12:46:42
这就是 VEC 在材料上粘附的SEM 图片
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5楼2012-08-12 17:19:40
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