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dingyonghui

铜虫 (小有名气)

[求助] [真诚求助] 免疫荧光染内皮细胞的Vinculin方法 (Focal Adhesion component)

RT, 本人初次做细胞实验,Ti经过改性的sample,进行内皮细胞培养后,想通过染色看细胞在样品表面粘附的情况,染Vinculin看Focal Adhesion 的分布,买了一抗是Anti-Vinculin antibody (Mouse monoclonal); 二抗是Goat polyclonal Secondary Antibody to Mouse IgG-H&L(FITC); 问题如下:
(1)染Vinculin用不用Triton X-100 破膜?判断标准是什么?
(2)一抗和二抗分别用什么来稀释啊?网上查了很多,有说用blocking solution (1%BSA/PBS),有的说直接PBS,有的说一抗和二抗不一样, 非常的困惑,恳求高手指点啊!!!
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Biomaterials
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jialong-dt

金虫 (正式写手)

突破者

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
mwyuer: 金币+1, 感谢回帖交流 2012-08-13 08:16:26
细胞膜蛋白染色:破坏细胞膜与否对结果影响不大,若要破坏,时间短些效果好点,切记时间勿超过10min;
抗体稀释:一般一抗使用1%的BSA封闭液比较合适;二抗PBS或者封闭液都可以使用。
不停的学习,只因为原来荒废了太多时间
8楼2012-08-12 20:55:03
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liubin

专家顾问 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
markar: 金币+1, 感谢回帖交流! 2012-08-13 12:46:24
对照试剂盒,一步一步的做就可以了。
2楼2012-08-12 16:42:53
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dingyonghui

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by liubin at 2012-08-12 16:42:53
对照试剂盒,一步一步的做就可以了。

谢谢回复!关键的问题就是试剂盒并没有给出具体详细的信息,只给出了推荐的working concentration range以及染色时间,并未说明用什么来dilute 一抗和二抗~~ 继续求助啊!
Biomaterials
3楼2012-08-12 17:04:18
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liubin

专家顾问 (著名写手)

【答案】应助回帖


markar: 金币+1, 感谢回帖交流 2012-08-13 12:46:33
亲,你去做个SEM 吧。
4楼2012-08-12 17:08:52
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