应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 做western blotting时，抗体稀释倍数对结果影响大吗？
71/1返回列表
查看: 3281  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

bb123456789

金虫 (正式写手)

[交流] 做western blotting时，抗体稀释倍数对结果影响大吗？

这段时间在做western blotting，样品是各个组织的总蛋白。前两次做一抗分别按1:6000和1:8000稀释的，后两次做用的1:10000.前两次做有结果，只是背景复杂，后两次没结果也看不到任何杂带。请大家帮忙分析分析吧。

第一个泳道是蛋白质marker，最后一个是纯化蛋白，中间是各组织样品。
做western blotting时，抗体稀释倍数对结果影响大吗？
20131104_213436.jpg


做western blotting时，抗体稀释倍数对结果影响大吗？-1
20131104_213336.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2013-11-04 21:41:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bingdong05

银虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-05 11:56:47
bb123456789: 金币+1, 是一抗孵育后多洗几次还是一抗二抗孵育后均多洗几次呢 2013-11-06 09:21:33
影响很大的，稀释倍数过低，背景很重，倍数过高的话一般条带较清晰，以前做的时候我都是按照1：10000稀释（说明书貌似建议6000，具体不记得了哈），楼主可以试着稀释8000左右，多洗涤几次，多洗涤几次，若是背景还是很杂，再放大稀释倍数
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2013-11-05 09:26:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

w雨过天晴j

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by bingdong05 at 2013-11-05 09:26:45
影响很大的，稀释倍数过低，背景很重，倍数过高的话一般条带较清晰，以前做的时候我都是按照1：10000稀释（说明书貌似建议6000，具体不记得了哈），楼主可以试着稀释8000左右，多洗涤几次，多洗涤几次，若是背景还是 ...

请问一下，背景很重是什么意思？
赞一下 回复此楼
3楼2013-11-05 09:29:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-05 11:56:53
bb123456789: 金币+1, 非常感谢 2013-11-06 09:22:35
可能你的目标蛋白的丰度不是很高，所以组织样品没有信号。但能测到纯化蛋白的信号，说明抗体工作，最好增加样品上样量并稀释纯化蛋白。一抗的稀释倍数当然比较重要，你的情况应该适当减少稀释倍数。
赞一下 回复此楼
4楼2013-11-05 09:31:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bingdong05

银虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
bb123456789: 金币+1 2013-11-06 09:34:17
引用回帖:
3楼: Originally posted by w雨过天晴j at 2013-11-05 09:29:18
请问一下，背景很重是什么意思？...

杂带很多，另外，三楼兄弟的提议你也要注意哈
赞一下 回复此楼
5楼2013-11-05 09:33:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bb123456789

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by w雨过天晴j at 2013-11-05 09:29:18
请问一下，背景很重是什么意思？...

就像第一张片子，带型模糊有杂带
赞一下 回复此楼
6楼2013-11-06 09:34:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

简牧风爱

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你要考虑抗体可检测的范围
赞一下 回复此楼
7楼2014-07-12 19:18:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 bb123456789 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 293调剂 +23 yj1221 2026-04-08 24/1200 2026-04-09 23:26 by may_新宇
[考研] 初试分332，一志愿报考西北工业大学， +11 故人?? 2026-04-09 11/550 2026-04-09 21:54 by JineShine
[考研] 一志愿华南理工大学331分材料求调剂 +4 天下ww 2026-04-09 4/200 2026-04-09 21:28 by bljnqdcc
[考研] 267求调剂 +5 再忙也要吃饭啊 2026-04-09 5/250 2026-04-09 18:47 by stone_128
[考研] 266求调剂，一志愿哈工程电子信息，本科获多项国奖和省奖 +4 lumine1 2026-04-06 4/200 2026-04-09 17:38 by vgtyfty
[考研] 化学308分求调剂 +21 你好明天你好 2026-04-07 23/1150 2026-04-08 22:32 by 凯凯要变帅
[考研] 一志愿211，0703化学305分求调剂 +20 严西西戏 2026-04-06 26/1300 2026-04-08 22:12 by 凯凯要变帅
[考研] 270求调剂 +3 031127 2026-04-06 4/200 2026-04-08 21:00 by 逆水乘风
[考研] 专硕310求调剂 +7 捞捞我…. 2026-04-04 8/400 2026-04-08 20:24 by yutian743
[考研] 280求调剂 +9 李rien 2026-04-04 9/450 2026-04-08 13:20 by lijunpoly
[考研] 调剂 +3 电气300求调剂不 2026-04-08 6/300 2026-04-08 09:39 by 电气300求调剂不
[考研] 机械调剂 +3 zzzbcb 2026-04-07 3/150 2026-04-07 22:19 by hemengdong
[考研] 277工科求调剂 +10 1915668 2026-04-04 11/550 2026-04-06 23:53 by 心媛意北
[考研] 308求调剂 +3 终不似从前 2026-04-05 3/150 2026-04-05 22:23 by hemengdong
[考研] 生物与医药调剂 +4 十七sa 2026-04-05 4/200 2026-04-05 20:05 by lys0704
[考研] 一志愿北交大材料工程总分358求调剂 +6 cs0106 2026-04-05 6/300 2026-04-05 16:34 by imissbao
[考研] 一志愿上海海洋大学083200食品学硕，求调剂，接受其他专业083200 +4 what张 2026-04-04 5/250 2026-04-05 14:07 by chw1980_0
[考研] 一志愿沪9，求生物学调剂，326分 +6 刘墨墨 2026-04-04 6/300 2026-04-04 19:44 by 唐沐儿
[考研] 348分环境工程·调剂 +10 吴彦祖24k 2026-04-03 11/550 2026-04-04 14:19 by 无际的草原
[考研] 一志愿重庆大学085404，总分314分，求调剂 +4 zf83hn 2026-04-03 4/200 2026-04-03 21:25 by 啵啵啵0119
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭