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Gloria001

铁杆木虫 (正式写手)

[求助] 请教为什Western Blot一定要用两种抗体? 已有3人参与

通常Western Blot中都使用两种抗体进行显色,为什么不能用一种呢?例如直接用连接了HRP的抗体检测抗原,然后显色呢?
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dragon2013

新虫 (初入文坛)

其他人都说了用两种抗体的作用,放大信号。也可以用一种,在目的蛋白中加上生物素标签,利用链霉素亲和的抗体(Streptavidin-HRP)就可以。但会有以一下问题:1.在用脱脂奶粉时会出现一些背景,因为在脱脂奶粉中会有生物素化的成分。2.会出现非特异条带,在提取蛋白中出目的条带外也会出现其他的生物素化的蛋白。
利用链霉素亲和的抗体,主要用于蛋白分离纯化,因为生物素化的蛋白与Streptavidin的作用较强可以使用更为剧烈的条件,例如可以将SDS达到1%洗脱。现在好多研究蛋白相互作用的都使用这种方法。
7楼2014-07-22 20:09:58
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dragon2013

新虫 (初入文坛)

为了信号放大
9楼2016-07-19 10:16:48
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