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Gloria001

铁杆木虫 (正式写手)

[求助] 请教为什Western Blot一定要用两种抗体? 已有3人参与

通常Western Blot中都使用两种抗体进行显色,为什么不能用一种呢?例如直接用连接了HRP的抗体检测抗原,然后显色呢?
请高手指点!
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hkqgeoffrey

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-07-07 13:11:43
Gloria001: 金币+1, 有帮助 2014-07-08 14:07:06
楼主说到的是两种可行的不同方法,前者是印迹,后者是ELISA的原理方法,但其实都涉及两种抗体的,楼主在查一下资料吧
兴趣是第一导师,我爱它,因此我毫无疲倦的探索
2楼2014-07-07 10:19:14
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
Gloria001: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-07-08 14:06:34
你说的是可以的啊,可以直接在一抗上做标记,比如HRP或者AP,但是这样做成本很高,相对而言在二抗上做标记,也就标记那么几种
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
3楼2014-07-07 13:12:57
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biotech_zhou

木虫 (著名写手)

待人以诚:专业/专注/专心

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
Gloria001: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-07-08 14:06:46
1.降低成本;2.放大信号,提高检测的灵敏度。
年末优惠荧光定量pcr、WB、ELISA技术服务一律六折!交流锤炼知识,用心构筑桥梁,以更优质的产品及技术服务助力科研;QQ:2513165427;Email:b
4楼2014-07-08 11:20:06
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简牧风爱

新虫 (初入文坛)

这个当然是可以的,二抗孵育可放大信号
5楼2014-07-12 19:07:43
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pengchenping

铁虫 (初入文坛)

可以啊,只是选择问题啦

[ 发自小木虫客户端 ]
6楼2014-07-14 12:42:22
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dragon2013

新虫 (初入文坛)

其他人都说了用两种抗体的作用,放大信号。也可以用一种,在目的蛋白中加上生物素标签,利用链霉素亲和的抗体(Streptavidin-HRP)就可以。但会有以一下问题:1.在用脱脂奶粉时会出现一些背景,因为在脱脂奶粉中会有生物素化的成分。2.会出现非特异条带,在提取蛋白中出目的条带外也会出现其他的生物素化的蛋白。
利用链霉素亲和的抗体,主要用于蛋白分离纯化,因为生物素化的蛋白与Streptavidin的作用较强可以使用更为剧烈的条件,例如可以将SDS达到1%洗脱。现在好多研究蛋白相互作用的都使用这种方法。
7楼2014-07-22 20:09:58
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Gloria001

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by dragon2013 at 2014-07-22 20:09:58
其他人都说了用两种抗体的作用,放大信号。也可以用一种,在目的蛋白中加上生物素标签,利用链霉素亲和的抗体(Streptavidin-HRP)就可以。但会有以一下问题:1.在用脱脂奶粉时会出现一些背景,因为在脱脂奶粉中会有 ...

谢谢,说明很详细。
8楼2014-07-24 09:34:40
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dragon2013

新虫 (初入文坛)

为了信号放大
9楼2016-07-19 10:16:48
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