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icedshell

木虫 (正式写手)

[求助] 液相色谱基线漂移 已有3人参与

各位高手,在205nm波长下检测(流动相是乙腈和水,梯度洗脱),色谱峰拖尾,加甲酸后拖尾峰没了,但是基线出现严重负漂移,等度洗脱则没有漂移问题,后面还要进质谱又不能换磷酸,柱子清洗过了,其他波长下也没有漂移问题。请问各位高手应该如何解决这个问题,谢谢。

液相色谱基线漂移
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xiaofei_lu

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
icedshell(费姚永芬代发): 金币+3, 谢谢交流应助 2014-07-05 09:04:58
icedshell: 金币+5 2014-07-07 01:14:20
10mM浓度的甲酸的紫外cutoff是210nm。你用的检测波长是205nm,这个波长下甲酸的吸收也很强。我用过乙酸,发现在pH和乙酸浓度不变的情况下改变乙腈和水的比例,流动相的紫外吸收是变化的,乙腈的比例越高,流动相的吸收越低。所以梯度的时候,基线这种情况是很难避免的。不知道你分离几种物质,有两个选择:1换用其他波长试试;2如果等度洗脱能满足分离要求就避免使用梯度洗脱。
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2楼2014-07-05 07:13:37
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kf1009

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
icedshell: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-07-07 01:07:15
你在乙腈里加入等量的甲酸试试看有没有效果,如果不影响分离和峰型,可以降低甲酸的量试试。另你上LC-MS用什么离子源,质谱信号强吗?
快乐不需要走遍天涯去寻找,只需播一粒种子在脚下。
4楼2014-07-05 12:30:17
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kf1009

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by icedshell at 2014-07-07 01:13:54
降低甲酸量,基线好很多的。图谱相对能行,带酚羟基的几个峰还有些略微拖尾。质谱是ESI源,现在还没上,现在色谱条件差不多了,准备上了。

另外想请教您一下,在乙腈里加入甲酸是有什么效果,在一些文献中看到过 ...

甲酸带有羧基,低波长会有紫外吸收,所以流动相含有甲酸,紫外检测器的噪音就会较大(低波长时)。你用梯度洗脱时,其中一相没有甲酸,流动相比例变化,两相混合后甲酸的比例变化,基线就会漂移;如果两相都加入等量甲酸,基线漂移就会降低。
另,含有酚羟基的化合物,本身拖尾应该不会太严重,上质谱用ESI源用负离子模式更好,用负离子模式流动相偏碱性离子信号更强些。高氯酸上不了LC-MS,但紫外用起来不错。
快乐不需要走遍天涯去寻找,只需播一粒种子在脚下。
9楼2014-07-07 08:58:07
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icedshell

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by xiaofei_lu at 2014-07-05 07:13:37
10mM浓度的甲酸的紫外cutoff是210nm。你用的检测波长是205nm,这个波长下甲酸的吸收也很强。我用过乙酸,发现在pH和乙酸浓度不变的情况下改变乙腈和水的比例,流动相的紫外吸收是变化的,乙腈的比例越高,流动相的吸 ...

您好,谢谢。分离的就是图里的那几个主要的峰。因为分析的物质极性小,紫外吸收也很弱,就仅在190-220nm之间,乙腈的比例用的很大,初始的就是从80%开始的,等度分离度有不好。再请问下,如果换乙酸的话会不会好一些,还是也差不多?
3楼2014-07-05 10:04:55
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xiaofei_lu

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by icedshell at 2014-07-05 10:04:55
您好,谢谢。分离的就是图里的那几个主要的峰。因为分析的物质极性小,紫外吸收也很弱,就仅在190-220nm之间,乙腈的比例用的很大,初始的就是从80%开始的,等度分离度有不好。再请问下,如果换乙酸的话会不会好一 ...

乙酸跟家算是差不多的,210纳米以下也有很强吸收。你可以试试高氯酸盐。
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5楼2014-07-05 23:40:29
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xiaofei_lu

木虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by icedshell at 2014-07-05 10:04:55
您好,谢谢。分离的就是图里的那几个主要的峰。因为分析的物质极性小,紫外吸收也很弱,就仅在190-220nm之间,乙腈的比例用的很大,初始的就是从80%开始的,等度分离度有不好。再请问下,如果换乙酸的话会不会好一 ...

高氯酸盐的UV cutoff 比较低但是缓冲能力不强,不过我不知道能不能进质谱,估计够呛
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6楼2014-07-05 23:45:08
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ajshen

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
icedshell: 金币+2, 有帮助 2014-07-07 01:14:27
乙酸和甲酸是一样的,低波长肯定有干扰。如果楼主最终目标是质谱检测,其实不会影响质谱的。高氯酸盐肯定不行,质谱会死的。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
JESSICA
7楼2014-07-06 08:46:02
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icedshell

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by kf1009 at 2014-07-05 12:30:17
你在乙腈里加入等量的甲酸试试看有没有效果,如果不影响分离和峰型,可以降低甲酸的量试试。另你上LC-MS用什么离子源,质谱信号强吗?

降低甲酸量,基线好很多的。图谱相对能行,带酚羟基的几个峰还有些略微拖尾。质谱是ESI源,现在还没上,现在色谱条件差不多了,准备上了。

另外想请教您一下,在乙腈里加入甲酸是有什么效果,在一些文献中看到过,但不是很理解。
8楼2014-07-07 01:13:54
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拉风蜗牛王

金虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by kf1009 at 2014-07-05 12:30:17
你在乙腈里加入等量的甲酸试试看有没有效果,如果不影响分离和峰型,可以降低甲酸的量试试。另你上LC-MS用什么离子源,质谱信号强吗?

牛人!
10楼2014-07-07 09:11:23
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