| 查看: 1901 | 回复: 3 | ||
hexianwei123新虫 (初入文坛)
|
[求助]
放线菌DNA提取 已有1人参与
|
|
求各位大侠帮忙看一下我的放线菌DNA提取方法哪里需要改进，每次都提不出DNA？ 步骤： 1. 取出培养2-3天的液体菌，静置； 2. 用无菌水离心洗绦2次，TE溶液洗绦一次； 3. 加入10mlTE溶液，匀浆器匀浆，悬浮，加入200ul的溶菌酶（25mg/ml）； 4. 37℃放置至溶液发粘，不时轻轻颠倒（7-8小时）； 5. 加入20%SDS（蛋白质变性剂，使细胞崩解）溶液至终浓度为2%； 6. 55℃烘箱放置1小时，不时轻轻颠倒，至溶液粘稠透明； 7. 加入等溶液体积TRis平衡酚，上下轻轻颠倒，室温放置10min，12000r，10min,4℃离心，吸取上层水相放入另外一个干净50ml离心管中。重复此步骤(可重复使用分离下层的酚)，直至溶液中间层没有沉淀出现。 8. 加入等体积氯仿(指变性的DNA)，上下轻轻颠倒，室温放置10分钟，12000r,10min,4℃,离心。吸取上清液放入一个干净的EP管中。 9. 加入1/10上清液体积的醋酸钠,再加入2倍体积的无水乙醇。如有絮状物，勾出； 10. 冰上放置20min,14000r,10min,4℃,离心； 11. 倒掉上清液，加入无水乙醇沉淀DNA，14000r,5min,4℃,轻轻倒掉上清液，在室温放置，使EP管中水风干，根据DNA的量加入无菌水使DNA溶解。（跑电泳） 有两次提取出来的是RNA,没有DNA，不知道怎么回事？请各位老师指点一下！谢谢！！ |
回复此楼» 猜你喜欢
梦想
已经有4人回复
-
中青基了要发朋友圈吗？
已经有6人回复
-
基金不中，共勉
已经有12人回复
-
能否申诉？
已经有7人回复
-
有多少人是今天查系统知道结果的？
已经有19人回复
-
面上意见出来了
已经有19人回复
-
国社科又开始会评了，不知道这次命运如何
已经有9人回复
-
为什么到现在没收到通知？
已经有5人回复
-
有没有仍没收到信息的
已经有8人回复
-
找导师
已经有7人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 放线菌的传代问题
已经有4人回复
- 为什么细菌基因组提取出来总是23K？
已经有8人回复
- ips细胞的基因组DNA提取出来你们都是怎么保存呢？
已经有8人回复
- 放线菌组DNA提取电泳条带弥散
已经有6人回复
- 微生物液氮冻融法DNA提取
已经有8人回复
- 放线菌DNA提取相关问题
已经有6人回复
- 真菌菌丝体提取DNA问题
已经有10人回复
- 革兰氏阳性菌基因组DNA
已经有7人回复
- 放线菌DNA 提取不出来，第一次做这方面的，没经验，还望指正
已经有19人回复
- 天根试剂盒提取，液氮研磨，DNA 提取不出来
已经有6人回复
- 求助：基因组DNA电泳无明显条带，成弥散状
已经有12人回复
- 基因组DNA提取结果
已经有17人回复
- 土壤微生物DNA提取不出来，是什么原因？
已经有19人回复
- 放线菌如何保存
已经有6人回复
- 放线菌DNA的提取
已经有4人回复
- DNA提取时用到的酚是什么酚？怎么配置？
已经有22人回复
- 【交流/求助】基因组DNA保存
已经有10人回复
- 细菌基因组DNA提取 交流
已经有18人回复
- 纤维素降解菌属于什么菌属，DNA模板提取的时候用什么方法好，海洋菌呢？
已经有7人回复
- 血液中提取细菌DNA
已经有5人回复
- 真菌基因组的提取
已经有4人回复
- 基因组DNA提取问题
已经有32人回复
- 全血基因组的提取问题
已经有6人回复
- 放线菌代谢粗提物提取
已经有16人回复
- 基因组提取过程中加入溶菌酶有白色沉淀
已经有13人回复
- 放线菌基因组DNA提取后，用TE不溶！！？
已经有20人回复
- 【求助/交流】提取的DNA在-20℃下保存后，怎样解冻？
已经有31人回复
- 【求助/交流】提取细菌基因组DNA的试剂盒
已经有8人回复
- 【分享】DNA重组实验中的部分技术
已经有159人回复
20093651
铁杆木虫 (职业作家)
- MicEPI: 2
- 应助: 212 (大学生)
- 金币: 5307.4
- 散金: 3276
- 红花: 63
- 沙发: 2
- 帖子: 3731
- 在线: 656.6小时
- 虫号: 1176129
- 注册: 2010-12-23
- 专业: 金属材料表面科学与工程
【答案】应助回帖
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励应助！ 2014-06-05 16:05:56
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励应助！ 2014-06-05 16:05:56
这么复杂？我们实验室通用方法：TE+溶菌酶，37°摇床过夜——20%SDS+PK——60°水浴1小时左右——后门就是抽提了。具体参见导师主编的教材 徐丽华，李文均，姜成林 放线菌系统学 |
hexianwei123
2楼2014-06-05 12:48:43
hexianwei123
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 125.5
- 帖子: 4
- 在线: 6.6小时
- 虫号: 3125623
- 注册: 2014-04-10
- 专业: 病原放线菌、放线菌感染与
3楼2014-06-05 15:17:11
20093651
铁杆木虫 (职业作家)
- MicEPI: 2
- 应助: 212 (大学生)
- 金币: 5307.4
- 散金: 3276
- 红花: 63
- 沙发: 2
- 帖子: 3731
- 在线: 656.6小时
- 虫号: 1176129
- 注册: 2010-12-23
- 专业: 金属材料表面科学与工程
4楼2014-06-05 18:26:24
投票: