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nihanlin313

铜虫 (小有名气)

[求助] 我的峰突然分不开 已有8人参与

我的流动相是10ml磷酸+1.0三氟乙酸  用三乙胺调节PH值至2.20     有机相是甲醇   柱子是C18柱   本来一直好好的  突然间就分不开,换了新开封的柱子,情况还是一样,也在不同的仪器上试过了,还是分不开。ph也从2.00。2.20,2.40几个点都做了  情况并没有好转,请问是什么原因?这个方法用了很久了,整个方法学都快验证完了,现在出现主峰跟主峰后面的杂质峰分不开了,做回收率只有50%。求助……
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改变在我手
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voyager88

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
nihanlin313(1949stone代发): 金币+2, 同意 2014-06-05 14:56:47
你需要把你的问题说得透彻些,光看你的陈述,难以看出问题。你得将你的梯度、出峰时间写明白,最好上传色谱图,别人才能帮你分析。还有你流动相里有磷酸、TFA,TEA,好复杂
微信公众号:Pharmaguider(药事纵横),主页:www.pharmaguider.cn
2楼2014-06-05 09:56:35
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xdx1984

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
nihanlin313(1949stone代发): 金币+1, 这个治标不治本 2014-06-05 14:57:26
建议换一个人重新配制流动相,色谱柱再换一根儿,人,机器,环静,样品要耐心排查。祝楼主早点解决问题。
3楼2014-06-05 10:13:30
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幸福暗恋你

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
nihanlin313(1949stone代发): 金币+1, 错误很低级 影响很严重 不过倒是常常发生 why?? 2014-06-05 14:58:10
建议将配流动相的所有试剂都换新的,有可能试剂已被污染。。。。我们以前就是,调pH用的冰醋酸被污染,连吸收峰都没了,找了一整天的原因,仪器从头查到尾,结果是冰醋酸的问题,可能是其他人取时不小心污染了,虽然用量很少但是后果很严重。。。
4楼2014-06-05 10:56:13
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1949stone

荣誉版主 (知名作家)

海纳百川

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
nihanlin313(News代发): 金币+1, 多谢回贴交流 2014-06-09 12:39:16
要是只是分离度不行了 还好办 稍加一点水可以改善 但是这个只是治标 解决目前的问题

你做中间精密度和方法的适应性 恐怕还会出问题
海纳百川止于至善
5楼2014-06-05 15:00:28
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yuchao8383

捐助贵宾 (正式写手)

悲催的老三

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
nihanlin313(News代发): 金币+2, 有帮助,多谢回贴交流 2014-06-09 12:39:03
方法是等度的还是梯度的?主峰出在什么位置?
既然换新柱子都分不开,那应该就是原来的柱子的问题吧,原来的柱子是专用的,有没有用过离子对试剂。
方法没验证完还好办,要是验证完了再出问题就难办了。
方法验证时最好用一根新的柱子,先做耐用性,没问题了其他的验证项目一般都能通过。建议楼主再试试C18别的厂家和型号的柱子,毕竟标准中一般只规定填料不特定柱子。再考虑一下试剂有没有变更厂家。
专爱纪录片
6楼2014-06-05 16:28:14
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hanxizhen

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你的回收率才50%,就可以做方法学?
加油
7楼2014-06-05 17:18:41
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afyjs

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

楼主,建议你拿全新的试剂重新做一遍,有的时候可能是试剂污染(比如有些马大哈的人把你原来用的试剂瓶拿去装废液)
上忍
8楼2014-06-09 09:22:30
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eroitoei

新虫 (正式写手)


这个情况可能与试剂和供试品等等有关
9楼2014-06-09 09:45:35
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artboywjh

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

不知楼主的柱温是多少,如果低于25℃的话会不会是现在天气热了导致柱温控不住,如果不是那就按其他虫友的建议试试了
10楼2014-06-09 10:51:29
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