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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 提取丝状真菌DNA
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cong葱

铜虫 (小有名气)

[求助] 提取丝状真菌DNA 已有1人参与

虫友们 谁知道 提取丝状真菌DNA时 加了氯仿、苯酚、异戊醇离心后在上层会出现很厚一层白色的物质 貌似沉淀的蛋白 而不是澄清的液体呢？白色物质是什么？
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1楼 2014-06-03 15:14:02
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cong葱

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 飞约疯人院 at 2014-06-03 15:41:58
可能是菌体本身的蛋白质，是不是很粘稠啊，也可能是真菌细胞壁多糖太多了

是呀 白色的 有时候还有油状物 反正不是清的液体 亲 知道问什么吗
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7楼2014-06-04 07:53:17
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cong葱

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by hutil1543 at 2014-06-04 14:20:08
你说的油状的是蛋清状的吧.那个是蛋白,酚和氯仿抽提那步没做好导致的.

亲 还想追问下 没抽提好的原因是什么？以前做没问题的 现在老是做不好 酚：氯仿：异戊醇=25：24:1，12000rpm 离心2分钟。
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9楼2014-06-12 08:28:06
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cong葱

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by hutil1543 at 2014-06-16 10:51:52
你抽提的时候剧烈摇晃了么？离心140000rpm，15min...

没有摇晃，加完试剂就离心，一直用12000rpm离心10分钟。需要摇晃吗
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11楼2014-06-18 11:58:17
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cong葱

铜虫 (小有名气)
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12楼: Originally posted by hutil1543 at 2014-06-19 11:34:27
请剧烈摇晃，剧烈，别怕摇碎了，这是我提DNA质量飞跃的关键性一步。...

哦 好的 摇晃的作用是？
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13楼2014-06-20 09:26:26
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cong葱

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by hutil1543 at 2014-06-20 10:15:12
让蛋白质充分变性。...

离心后 变性的蛋白是在上层吗？
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15楼2014-06-21 10:52:33
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cong葱

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by hutil1543 at 2014-06-21 20:56:55
中间啊。。。怎么可能在上层。下层是有机溶剂，中间是蛋白，上层是含有dna的buffer...

嗯 以前做的也在中间 可是后来就在上层了 好多 离心后上层没有上清液
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17楼2014-06-23 11:33:57
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