应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 植物微生物总DNA 的提取方法
61/1返回列表
查看: 1109  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

一生的约定

金虫 (小有名气)

[求助] 植物微生物总DNA 的提取方法 已有2人参与

有没有人提过植物微生物的总DNA 啊？跪求具体操作步骤啊.顺便问下植物总DNA 和微生物总DNA 是一样的吗？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
广交益友，多多学习！
1楼 2014-05-23 16:44:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-05-24 22:39:17
提DNA的方法不都是大同小异，没什么难度滴

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
2楼2014-05-23 17:30:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

一生的约定

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-05-23 17:30:19
提DNA的方法不都是大同小异，没什么难度滴

嗯嗯是的，但是我提了好多次都没提出来，我要提微生物的总DNA
赞一下 回复此楼
广交益友，多多学习！
3楼2014-05-24 17:03:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 一生的约定 at 2014-05-24 17:03:49
嗯嗯是的，但是我提了好多次都没提出来，我要提微生物的总DNA...

那个量肯定是跑电泳看不到的，直接PCR吧

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
4楼2014-05-24 17:09:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

紫箫ymj

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-05-24 22:39:28
1) 挑取单菌落至5mL液体培养基中于37℃，180r/min摇床上过夜培养，分装于2mL的EP管中；
2) 将EP管12000r/min离心15s收集菌体，STE（什么试剂？）洗涤2次，再次离心，菌体重悬于1mLTE溶液中；
3) 加入100mg/mL溶菌酶溶液5ul( 终浓度为100ug/ml)，37℃保温20min；
4) 再加入100 ul蛋白酶K，56℃，1h；
5) 再加入RNase（10mg/ml）2.5ul，至终浓度25 ug/ml，然后加入10%SDS溶液70ul，EDTA溶液50 ul ，37℃保温30min；
6) 加入蛋白酶K(20mg/ml)2ul，终浓度为50ul/ml，37℃保温60~90min；
7) 加入等体积的酚，混匀，12000r/min离心5min，取上清于另一离心管中；
8) 上清液中加入等体积的酚：氯仿，混匀，12000r/min离心5min，取上清于另一个离心管中；
9) 加入2倍体积无水乙醇沉淀，-20℃静置30min后，12000r/min离心5min；
10) 70%乙醇洗涤1次，室温下晾干，加30 ulTE溶解，于-20℃保存备用；

这个方法我用过很多次，每次都成功，祝你好运！
还有，如果想省事的话可以试试水煮法。但对于细胞壁较厚的G+菌，这种方法就不管用了
赞一下 回复此楼
岂能尽如人意，但求无愧我心！
5楼2014-05-24 21:55:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

一生的约定

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 紫箫ymj at 2014-05-24 21:55:07
1) 挑取单菌落至5mL液体培养基中于37℃，180r/min摇床上过夜培养，分装于2mL的EP管中；
2) 将EP管12000r/min离心15s收集菌体，STE（什么试剂？）洗涤2次，再次离心，菌体重悬于1mLTE溶液中；
3) 加入100mg/mL溶菌 ...

谢谢，可是我要提的是茶叶中微生物的总DNA额，而且茶叶是发酵中的老叶
赞一下 回复此楼
广交益友，多多学习！
6楼2014-05-26 08:23:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 一生的约定 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭