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植物微生物总DNA 的提取方法 已有2人参与
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| 有没有人提过植物微生物的总DNA 啊？跪求具体操作步骤啊.顺便问下植物总DNA 和微生物总DNA 是一样的吗？ |
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Neo2000
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2楼2014-05-23 17:30:19
3楼2014-05-24 17:03:49
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4楼2014-05-24 17:09:29
【答案】应助回帖
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1) 挑取单菌落至5mL液体培养基中于37℃，180r/min摇床上过夜培养，分装于2mL的EP管中； 2) 将EP管12000r/min离心15s收集菌体，STE（什么试剂？）洗涤2次，再次离心，菌体重悬于1mLTE溶液中； 3) 加入100mg/mL溶菌酶溶液5ul( 终浓度为100ug/ml)，37℃保温20min； 4) 再加入100 ul蛋白酶K，56℃，1h； 5) 再加入RNase（10mg/ml）2.5ul，至终浓度25 ug/ml，然后加入10%SDS溶液70ul，EDTA溶液50 ul ，37℃保温30min； 6) 加入蛋白酶K(20mg/ml)2ul，终浓度为50ul/ml，37℃保温60~90min； 7) 加入等体积的酚，混匀，12000r/min离心5min，取上清于另一离心管中； 8) 上清液中加入等体积的酚：氯仿，混匀，12000r/min离心5min，取上清于另一个离心管中； 9) 加入2倍体积无水乙醇沉淀，-20℃静置30min后，12000r/min离心5min； 10) 70%乙醇洗涤1次，室温下晾干，加30 ulTE溶解，于-20℃保存备用； 这个方法我用过很多次，每次都成功，祝你好运！ 还有，如果想省事的话可以试试水煮法。但对于细胞壁较厚的G+菌，这种方法就不管用了 |
5楼2014-05-24 21:55:07
6楼2014-05-26 08:23:00
