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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 提取真菌和细菌的DNA所需要的试剂
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一生的约定

金虫 (小有名气)

[求助] 提取真菌和细菌的DNA所需要的试剂

请问提取真菌和细菌的DNA 分别要用到哪些试剂啊
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广交益友，多多学习！
1楼 2013-11-14 10:42:05
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回帖置顶 ( 共有1个 )

dllchina

木虫 (著名写手)

有机的微生物大神

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一生的约定: 回帖置顶 2013-11-16 08:30:35
酶法小量DNA提取
1．50mg菌体加1×TE稀释成2mg/ml 的溶菌酶（ly)500μL放入37℃摇床1—2小时(放线菌需要摇过夜）；
2．加20%SDS 50μL 及蛋白酶pK 5μL震荡混匀1分钟, 放入55℃烘箱30-60分钟〔pK浓度为20ug/mL〕；
3．加550 μL 苯酚:氯仿:异戊醇（25：24：1）, 震荡混匀，12000rpm离心10分钟, 吸取上清液(不要吸到中间渣滓，重复抽提2次)；
4．上清液加入50 μL 3mol/L乙酸钠(PH 4.8-5.2)混匀后加500 μL异丙醇，放入-20℃冰箱1-2小时或过夜；或者加800ul无水乙醇，加80μL 3mol/L乙酸钠(PH 4.8-5.2)室温放置10分钟以上；
5．12000 rpm 离心10分钟，去除上清液,加200μL 70% 乙醇，轻摇洗盐1—2次，12000 rpm低温离心 5分钟，弃乙醇；
6．(37-55)℃干燥后加1×TE 50μL溶解DNA(视DNA量而定), -20℃保存备用。
真菌的我就不清楚咯
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6楼2013-11-15 10:03:14
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原罪的祷告

金虫 (正式写手)

慧耘生物

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励应助！ 2013-11-14 21:38:50
现在大多直接买个提取试剂盒，不贵，而且很方便！
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2楼2013-11-14 11:22:46
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一生的约定

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 原罪的祷告 at 2013-11-14 11:22:46
现在大多直接买个提取试剂盒，不贵，而且很方便！

哦哦谢谢啊
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3楼2013-11-14 19:52:47
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songhuiyin

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
找试剂公司买个试剂盒，按照步骤做就可以了
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4楼2013-11-14 22:06:05
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一生的约定

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by songhuiyin at 2013-11-14 22:06:05
找试剂公司买个试剂盒，按照步骤做就可以了

嗯嗯谢谢咯
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广交益友，多多学习！
5楼2013-11-15 09:19:04
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见神一笑

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
小提用试剂盒，大提用酚/氯仿/异戊醇法，具体操作分子克隆那本书上有
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好好努力
7楼2013-11-15 19:11:26
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一生的约定

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 见神一笑 at 2013-11-15 19:11:26
小提用试剂盒，大提用酚/氯仿/异戊醇法，具体操作分子克隆那本书上有

嗯嗯谢谢咯
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8楼2013-11-16 08:18:40
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一生的约定

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by dllchina at 2013-11-15 10:03:14
酶法小量DNA提取
1．50mg菌体加1×TE稀释成2mg/ml 的溶菌酶（ly)500μL放入37℃摇床1—2小时(放线菌需要摇过夜）；
2．加20%SDS 50μL 及蛋白酶pK 5μL震荡混匀1分钟, 放入55℃烘箱30-60分钟〔pK浓度为20ug/mL〕； ...

感谢
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广交益友，多多学习！
9楼2013-11-16 08:31:45
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梧桐柒夕

主管区长 (文坛精英)

优秀区长优秀区长优秀区长优秀区长优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
买试剂盒比较省事，而且能确保你能提取出来。OMEGA的比较好用。
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轻描淡写，浓墨重彩。
10楼2013-11-16 20:49:23
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