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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 实验室分析、仪器 » 高效液相色谱的流动相问题
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gogoxiaobai

金虫 (小有名气)

[求助] 高效液相色谱的流动相问题 已有3人参与

我最近在用反相色谱做实验，我的流动相A是2%乙腈水溶液，流动相B是60%乙腈水溶液，我走样品的谱图中有四个峰和我走溶剂出的谱图的四个峰是一致的，我尝试过冲洗柱子，冲洗系统，更换流动相，更换柱子，换过水，但是走溶剂都会出现这四个峰，但是其中我把流动相起始乙腈浓度变为20%乙腈水溶液时就没有那四个峰了，我实在想不出是什么问题了，是乙腈有问题么？请大家帮我分析下，感激不尽啦
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努力，努力，再努力！
1楼 2014-05-25 17:56:38
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南海猪

金虫 (著名写手)

The only one

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
大量的水系溶解了柱子填充物~~~纯属猜想~~~~
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出来混，不是你帮我就是我帮你~~~
2楼2014-05-25 19:09:26
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liangzhili

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1. 要说明你用是哪一种色谱柱，一般的C18是不能长时间承受2%乙腈水溶液流动相的，普通C18柱子水的比例最高为95%，且不能长时间维持。只有部分特殊说明的柱子才能承受这么高比例水。否则你色谱柱的部分填料基质会溶出，可能出现你所描述的峰。

2. 要说明你是做的等度还是梯度洗脱。

3.流动相中气体没有脱干净也可能导致鬼峰的出现。
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努力就有机会！
3楼2014-05-25 20:06:02
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gogoxiaobai

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by liangzhili at 2014-05-25 00:06:02
1. 要说明你用是哪一种色谱柱，一般的C18是不能长时间承受2%乙腈水溶液流动相的，普通C18柱子水的比例最高为95%，且不能长时间维持。只有部分特殊说明的柱子才能承受这么高比例水。否则你色谱柱的部分填料基质会溶出 ...

我用的C18色谱柱，我试过起始2%的，也试过起始5%的，进的溶剂都有四个峰，我的洗脱方式是梯度洗脱，流动相现用现配过膜脱气，但都是还有，我好纠结，到底怎么回事呢？
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努力，努力，再努力！
4楼2014-05-25 20:14:22
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liangzhili

铁杆木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by gogoxiaobai at 2014-05-25 20:14:22
我用的C18色谱柱，我试过起始2%的，也试过起始5%的，进的溶剂都有四个峰，我的洗脱方式是梯度洗脱，流动相现用现配过膜脱气，但都是还有，我好纠结，到底怎么回事呢？...

最有可能的话你的水相比例过高，另外如果你的梯度变的太快的话也有可能出现鬼峰，你可以再试一下。不必和文献强行一致，只要你做的梯度洗脱能完全将你的目标物分离洗出就可以了。
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努力就有机会！
5楼2014-05-25 20:28:57
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guangyuel

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

可能是水相太高了，样品是用什么溶解的，是不是和流动相不容或差异较大，还有梯度洗脱流动相是不变化太快导致的
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6楼2014-10-19 22:06:34
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