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gogoxiaobai

金虫 (小有名气)

[求助] 高效液相色谱的流动相问题 已有3人参与

我最近在用反相色谱做实验,我的流动相A是2%乙腈水溶液,流动相B是60%乙腈水溶液,我走样品的谱图中有四个峰和我走溶剂出的谱图的四个峰是一致的,我尝试过冲洗柱子,冲洗系统,更换流动相,更换柱子,换过水,但是走溶剂都会出现这四个峰,但是其中我把流动相起始乙腈浓度变为20%乙腈水溶液时就没有那四个峰了,我实在想不出是什么问题了,是乙腈有问题么?请大家帮我分析下,感激不尽啦
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努力,努力,再努力!
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liangzhili

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1. 要说明你用是哪一种色谱柱,一般的C18是不能长时间承受2%乙腈水溶液流动相的,普通C18柱子水的比例最高为95%,且不能长时间维持。只有部分特殊说明的柱子才能承受这么高比例水。否则你色谱柱的部分填料基质会溶出,可能出现你所描述的峰。

2. 要说明你是做的等度还是梯度洗脱。

3.流动相中气体没有脱干净也可能导致鬼峰的出现。
努力就有机会!
3楼2014-05-25 20:06:02
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南海猪

金虫 (著名写手)

The only one

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
大量的水系溶解了柱子填充物~~~纯属猜想~~~~
出来混,不是你帮我就是我帮你~~~
2楼2014-05-25 19:09:26
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gogoxiaobai

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by liangzhili at 2014-05-25 00:06:02
1. 要说明你用是哪一种色谱柱,一般的C18是不能长时间承受2%乙腈水溶液流动相的,普通C18柱子水的比例最高为95%,且不能长时间维持。只有部分特殊说明的柱子才能承受这么高比例水。否则你色谱柱的部分填料基质会溶出 ...

我用的C18色谱柱,我试过起始2%的,也试过起始5%的,进的溶剂都有四个峰,我的洗脱方式是梯度洗脱,流动相现用现配过膜脱气,但都是还有,我好纠结,到底怎么回事呢?
努力,努力,再努力!
4楼2014-05-25 20:14:22
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liangzhili

铁杆木虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by gogoxiaobai at 2014-05-25 20:14:22
我用的C18色谱柱,我试过起始2%的,也试过起始5%的,进的溶剂都有四个峰,我的洗脱方式是梯度洗脱,流动相现用现配过膜脱气,但都是还有,我好纠结,到底怎么回事呢?...

最有可能的话你的水相比例过高,另外如果你的梯度变的太快的话也有可能出现鬼峰,你可以再试一下。不必和文献强行一致,只要你做的梯度洗脱能完全将你的目标物分离洗出就可以了。
努力就有机会!
5楼2014-05-25 20:28:57
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