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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药物分析 » 色谱柱与流动相问题
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wensdo

金虫 (小有名气)

[求助] 色谱柱与流动相问题

各位老师，我测样品用的流动相是甲醇-乙酸铵，梯度洗脱，C18柱 ，但很短时间，在40min左右就鼓出一个包，不规则的，请教各位，有没碰到类似情况，该如何保护色谱柱，使柱子寿命更长？
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1楼2011-07-25 15:24:51
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中药2000

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主

【答案】应助回帖

该如何保护色谱柱，使柱子寿命更长？
每次做完实验彻底冲柱子。
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2楼2011-07-25 20:26:18
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石呓

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
novus(金币+1): 谢谢交流，欢迎常来药学版！ 2011-07-25 22:53:59
wensdo(金币+10): 2011-10-25 10:09:37
你说40min出了一个包，具体什么情况说得不是很清楚，有可能是样品残留，或者其他什么情况，不见得是柱子柱效不好嘛~
关于柱子保护的问题，我个人觉得就是善待柱子。
比如你做样前用甲醇水溶液梯度调整比例，从高浓度慢慢降低浓度，直到你所用流动相所适应的甲醇浓度
又如做样完了，用不含盐的等浓度甲醇水溶液冲洗柱子，除去柱子中的盐，然后慢慢升高甲醇浓度，直到保存溶剂所要求的条件。
甚至，在你调流速时，不要马上从0升到到1.0，而是以0.2的流速慢慢升高，让柱子有个适应的过程，都是对柱子有保护作用的。
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路漫漫其修远兮，吾将上下而求索。
3楼2011-07-25 21:01:54
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wensdo

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 石呓 at 2011-07-25 21:01:54:
你说40min出了一个包，具体什么情况说得不是很清楚，有可能是样品残留，或者其他什么情况，不见得是柱子柱效不好嘛~
关于柱子保护的问题，我个人觉得就是善待柱子。
比如你做样前用甲醇水溶液梯度调整比例，从高 ...

我们一直就是这么做的，而且也换用了好几根柱子，都存在着问题，怀疑是不是流动相的问题，有没可能流动相把检测池给污染了？要是这样的话，该如何处理？
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4楼2011-07-26 07:36:21
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liu_wei

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
qinhy(金币+1): 多谢应助~~ 2011-08-01 18:30:22
建议加入的乙酸铵要为色谱级的，要是没有色谱级的使用分析级的一定要过滤后使用。流动相中加入盐本来就很难平衡，建议盐的浓度不要超过10mM.检测器没有那么容易污染，要是真污染了就只能用异丙醇冲冲了。你可以检查一下看看溶剂瓶中的滤头是不是受到污染，基线出现问题大多都是水相有问题。
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5楼2011-07-26 10:05:12
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xiaowang268

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
qinhy(金币+2): 鼓励新虫回帖~ 2011-08-01 18:30:38
流动相有盐的话，用后应用5%的有机水溶液冲柱，再用50%，之后纯甲醇冲柱。
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6楼2011-07-26 15:06:14
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石呓

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
qinhy(金币+1): 多谢应助~~ 2011-08-01 18:30:48
引用回帖:
Originally posted by wensdo at 2011-07-26 07:36:21:
我们一直就是这么做的，而且也换用了好几根柱子，都存在着问题，怀疑是不是流动相的问题，有没可能流动相把检测池给污染了？要是这样的话，该如何处理？

要看是不是流动相的问题，可以进一针空白嘛，看看是不是在同一位置还有这样的峰。如果有，那就是流动相问题了。 如果你们溶样的不是流动相本身，另外再进一针溶剂，看看有没有问题。
既然你换过柱子，那么多数应该不是柱子问题了。
你怀疑是流通池的问题，长时间使用但不进行清洗是有可能会被污染的。也或者是流动相中缓冲盐的残留导致不规则峰的出现。不知道你有没有观察过这段时间高液压力是不是比以往增大呢，是这个情况，有可能是什么环节有堵塞的情况，一段一段的排除吧，是流通池堵，可以手动用低浓度的甲醇水溶液反冲，然后连接泵开始以低流速冲洗，观察压力变化，慢慢升高流速至压力正常。
下面给你说说我们处理流通池污染问题的处理方法，看能帮到你不：
流通池污染了，可以拆下从检测器进口的一端，一般那个地方是接着二通管的，拆下二通管的一端，用注射器吸取异丙醇手动清洗（注射器针头是带螺丝的那种，可以和二通管很好的连接，不用担心漏出来的问题)。这个压力有点大，要很使劲的，呵呵。
如果这样都不行，那就要拆下流通池了，这个不同的仪器操作就有所不同了，你参考下你们的说明书。流通池拆下了可以用乙醇超声一会，然后安装好，正常操作就好。
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路漫漫其修远兮，吾将上下而求索。
7楼2011-07-26 22:39:25
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wensdo

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 石呓 at 2011-07-26 22:39:25:
要看是不是流动相的问题，可以进一针空白嘛，看看是不是在同一位置还有这样的峰。如果有，那就是流动相问题了。 如果你们溶样的不是流动相本身，另外再进一针溶剂，看看有没有问题。
既然你换过柱子，那么多数应 ...

空白溶剂里也有，而且只要做过这个项目的液相和柱子，基本下次用就会出现这一情况，鼓一个包，而且乙酸铵浓度用到了20mM，不过用的是分析纯的，不是色谱的，不知道与这个有没关系
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8楼2011-08-01 16:11:08
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pangge00

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
qinhy(金币+3): 鼓励新虫回帖~ 2011-08-01 18:31:07
及时冲洗色谱柱：每次分析结束时，应立即冲洗色谱柱，先用水冲洗缓冲盐，然后过度到强溶剂冲洗，根据色谱柱的说明书来具体操作。如：先用水：甲醇/乙腈=80:20冲洗30min以上，然后用水：甲醇/乙腈=20:80冲洗30min以上，然后保存在80%甲醇/乙腈溶液中，若长时间不用，应保存在100%甲醇/乙腈溶液中。
  平时不做分析时，色谱柱也要定期冲洗，且应保证柱的两端用堵头堵塞严实，防止柱内的保存液干涸，损坏色谱柱。
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9楼2011-08-01 16:55:24
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ronaldoli198311

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

在梯度更换的那个时间段有可能出现这个情况
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10楼2011-08-03 15:49:45
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