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【求助】求助：液相 反相色谱柱问题？ 已有10人参与
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条件：1.C18的反相色谱柱，分析处理甲基丙烯酸酯（MMA），样品中还含有极微量的乙酰半胱氨酸，采用甲醇和水作流动相，样品均溶解在纯水中。每次测样很多，大概有80来个吧。 2 每次操作也都是将流动相过滤超声后使用。用完后，用5%的甲醇冲洗半小时，再用纯乙晴冲洗一个小时。 3 因为只是分析甲基丙烯酸酯，标样也就配制了不同浓度的甲基丙烯酸脂。 问题：第一次实验开始用的是新柱子，先做标样MMA，出的峰很漂亮，时间也一致。开始测两样品的时候，出封时间随着测量样品时间的增加，慢慢的会从8min增加到9min。但是峰型还是很尖。 第二次测试，同样的步骤，但是封出现拖尾，出封时间从9min后移至11min。 第三次测试，出封在10min，并且基线波动非常大，以至于根本就不能够用了。。 测试的仪器没有控温柱，我怀疑是温度的原因。因为这几天室内温度一只在降低。我只是对MMA进行定量的分析，晚一点点出封，只要和标样时间一致我就觉得可以用的。不知道这样可以不？ 关于封拖尾，我觉得是测试时间太长，导致柱效降低。因为第二次试验结束，马上就得第三次实验，我就用5%的甲醇冲洗半小时，再用纯乙晴冲洗一个小时。到第三次实验的时候，峰型图的基线波动十分大的话，我想柱子是不是已经失效了。 我现在想让色谱柱再生。我看了很多再生的资料，都是因为有缓冲盐作流动相后柱子的处理，我样品不含缓冲盐，那么我怎么冲洗改进下更好呢。。。希望大家指点下。。 |
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2楼2010-08-31 15:29:30
luomuwuhen
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| 不知道你用的啥比例的甲醇和水，保留时间漂移一般是温度的影响，楼主说的峰拖尾估计是有没分离好的组分和主峰重叠。如果流动相里没有缓冲盐只是甲醇和水，用完的话直接用纯甲醇冲掉就可以了，不用先用5%的甲醇冲柱子。再生反相柱子的话，建议楼主用异丙醇反冲柱子过夜即可，流速控制在0.5ml以下。不过按你的说法，是新柱子应该不会是柱子问题。还有，新柱子刚用的时候最好先用甲醇或者乙腈小流速冲半天活化一下，如果上来就用大比例的水相来冲，很容易把固定相冲塌。 |
3楼2010-08-31 15:35:42
jane291
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4楼2010-08-31 15:39:58
5楼2010-08-31 15:40:37
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甲基丙烯酸酯这东西在水中的溶解度好吗？样品的基质是否复杂，如果复杂，最好加一保护柱，还有一次性做这么多样，后面的样是不是都在下半夜进样了，昼夜温差大吗？ 关于溶解度，我计算过，在我样品测试的范围内事全部溶解的。 样品成分不复杂，第一次测试的时候，出峰还是很干净，分析得很清楚的。 但是后来估计是柱子效果下降，峰很乱，基线也不平了。 昼夜温差有1度，我觉得出峰时间后延和温度有一定关系。但是我只需要确定样品出峰在哪，用面积定量就好了，样品多也得连着测完。  我每次使用前，流动相都会走一个多小时平衡的。。。 开始测量标准样的时候，基线还是很平的，一到测样品就波动大了。 不过第一次用新柱的时候就用乙腈充了两个小时，再用流动相甲醇和水平衡了一个小时用的。第一次测的时候，样品并没有出现拖尾，以后出现拖尾的话，应该不是没有分离开，估计是柱效降低了吧？ |
6楼2010-08-31 21:05:02
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甲基丙烯酸酯这东西在水中的溶解度好吗？样品的基质是否复杂，如果复杂，最好加一保护柱，还有一次性做这么多样，后面的样是不是都在下半夜进样了，昼夜温差大吗？ 关于溶解度，我计算过，在我样品测试的范围内事全部溶解的。 样品成分不复杂，第一次测试的时候，出峰还是很干净，分析得很清楚的。 但是后来估计是柱子效果下降，峰很乱，基线也不平了。 昼夜温差有1度，我觉得出峰时间后延和温度有一定关系。但是我只需要确定样品出峰在哪，用面积定量就好了，样品多也得连着测完。 我每次使用前，流动相都会走一个多小时平衡的。。。 开始测量标准样的时候，基线还是很平的，一到测样品就波动大了。 不过第一次用新柱的时候就用乙腈充了两个小时，再用流动相甲醇和水平衡了一个小时用的。第一次测的时候，样品并没有出现拖尾，以后出现拖尾的话，应该不是没有分离开，估计是柱效降低了吧？ |
7楼2010-08-31 21:05:46
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甲基丙烯酸酯这东西在水中的溶解度好吗？样品的基质是否复杂，如果复杂，最好加一保护柱，还有一次性做这么多样，后面的样是不是都在下半夜进样了，昼夜温差大吗？ 关于溶解度，我计算过，在我样品测试的范围内事全部溶解的。 样品成分不复杂，第一次测试的时候，出峰还是很干净，分析得很清楚的。 但是后来估计是柱子效果下降，峰很乱，基线也不平了。 昼夜温差有1度，我觉得出峰时间后延和温度有一定关系。但是我只需要确定样品出峰在哪，用面积定量就好了，样品多也得连着测完。 我每次使用前，流动相都会走一个多小时平衡的。。。 开始测量标准样的时候，基线还是很平的，一到测样品就波动大了。 不过第一次用新柱的时候就用乙腈充了两个小时，再用流动相甲醇和水平衡了一个小时用的。第一次测的时候，样品并没有出现拖尾，以后出现拖尾的话，应该不是没有分离开，估计是柱效降低了吧？ |
8楼2010-08-31 21:06:28
lemonin2008
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9楼2010-09-01 07:34:13
lemonin2008
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