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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 【求助】求助：液相 反相色谱柱问题？
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coolkerjuuw

[交流] 【求助】求助：液相 反相色谱柱问题？ 已有10人参与

条件：1.C18的反相色谱柱，分析处理甲基丙烯酸酯（MMA），样品中还含有极微量的乙酰半胱氨酸，采用甲醇和水作流动相，样品均溶解在纯水中。每次测样很多，大概有80来个吧。
      2 每次操作也都是将流动相过滤超声后使用。用完后，用5%的甲醇冲洗半小时，再用纯乙晴冲洗一个小时。
      3 因为只是分析甲基丙烯酸酯，标样也就配制了不同浓度的甲基丙烯酸脂。

问题：第一次实验开始用的是新柱子，先做标样MMA，出的峰很漂亮，时间也一致。开始测两样品的时候，出封时间随着测量样品时间的增加，慢慢的会从8min增加到9min。但是峰型还是很尖。
      第二次测试，同样的步骤，但是封出现拖尾，出封时间从9min后移至11min。
      第三次测试，出封在10min，并且基线波动非常大，以至于根本就不能够用了。。

测试的仪器没有控温柱，我怀疑是温度的原因。因为这几天室内温度一只在降低。我只是对MMA进行定量的分析，晚一点点出封，只要和标样时间一致我就觉得可以用的。不知道这样可以不？

关于封拖尾，我觉得是测试时间太长，导致柱效降低。因为第二次试验结束，马上就得第三次实验，我就用5%的甲醇冲洗半小时，再用纯乙晴冲洗一个小时。到第三次实验的时候，峰型图的基线波动十分大的话，我想柱子是不是已经失效了。

我现在想让色谱柱再生。我看了很多再生的资料，都是因为有缓冲盐作流动相后柱子的处理，我样品不含缓冲盐，那么我怎么冲洗改进下更好呢。。。希望大家指点下。。
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1楼 2010-08-31 13:57:36
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lemonin2008

铁杆木虫 (正式写手)
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happy169(金币+1):谢谢参与，欢迎常来分析版 2010-09-04 17:01:19
引用回帖:
Originally posted by coolkerjuuw at 2010-08-31 21:05:02:



甲基丙烯酸酯这东西在水中的溶解度好吗？样品的基质是否复杂，如果复杂，最好加一保护柱，还有一次性做这么多样，后面的样是不是都在下半夜进样了，昼夜温差大吗？


关于溶解度，我计算过，在我样品测试 ...

你这个峰好像包含着一个小峰似的，不太像拖尾啊！嘿嘿，当然也许是图太小，没看清楚
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10楼2010-09-01 08:03:03
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coolkerjuuw

怎么没大侠知道啊？
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2楼2010-08-31 15:29:30
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luomuwuhen

金虫 (著名写手)
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pplover(金币+1):感谢参与！ 2010-08-31 21:35:18
不知道你用的啥比例的甲醇和水，保留时间漂移一般是温度的影响，楼主说的峰拖尾估计是有没分离好的组分和主峰重叠。如果流动相里没有缓冲盐只是甲醇和水，用完的话直接用纯甲醇冲掉就可以了，不用先用5%的甲醇冲柱子。再生反相柱子的话，建议楼主用异丙醇反冲柱子过夜即可，流速控制在0.5ml以下。不过按你的说法，是新柱子应该不会是柱子问题。还有，新柱子刚用的时候最好先用甲醇或者乙腈小流速冲半天活化一下，如果上来就用大比例的水相来冲，很容易把固定相冲塌。
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药物合成
3楼2010-08-31 15:35:42
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jane291

金虫 (小有名气)
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pplover(金币+1):感谢参与！长时间不用为什么要保存在95%的甲醇中呢？ 2010-08-31 21:36:17
我们冲洗柱子的时候一般设置有两个浓度，一个低于洗脱液浓度（即你配置的用于走液相的那个浓度），另一个高于洗脱液浓度。一般来讲，用5%甲醇-水溶液冲洗20min，再用90%甲醇-水冲洗20min，交替两次后，最后柱子保存在100%甲醇里面，如果不是柱子特别脏不会用乙腈一直冲洗的。如果柱子长时间不用就保存在95%甲醇里。
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4楼2010-08-31 15:39:58
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