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撒的发生地方

铁虫 (初入文坛)

[求助] 植物rna提取已有3人参与

为什么拿RNAiso Plus 试剂盒提种子rna。异丙醇沉降后沉淀不溶解呢？电泳只有5s条带。氯仿抽提两次，而且用30%乙醇去多糖了啊。求解。
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1楼2014-05-13 19:20:36
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
建议手提，试剂盒搞不定的，种子里糖多？

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2楼2014-05-13 19:49:32
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中庸001

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-05-15 13:58:27
种子里的糖多的话，你可以用CTAB法抽提，我做棉花的，用这种方法很有效。
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3楼2014-05-14 10:40:22
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撒的发生地方

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-05-13 19:49:32
建议手提，试剂盒搞不定的，种子里糖多？

我提的是沙葱的rna，今天下午又提了一次，这次我先用30%乙醇去多糖，然后用氯仿抽提4次。对照是先用氯仿抽提然加乙醇。结果对照的叶子出来了，其他的都没出来。还是和原来一样，沉淀不溶解。这到底是怎么回事啊？
植物rna提取
IMG_20140514_202338.jpg
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4楼2014-05-14 20:43:01
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撒的发生地方

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 中庸001 at 2014-05-14 10:40:22
种子里的糖多的话，你可以用CTAB法抽提，我做棉花的，用这种方法很有效。

ctab法的话，试剂都不是现成的。而且老师催的急啊。这是电泳图，帮我分析一下啦
植物rna提取-1
IMG_20140514_202338.jpg
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5楼2014-05-14 20:46:38
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jiangleiyu

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-05-15 13:58:34
沉淀不溶解是主要由于其中含有大量多糖，用30%乙醇沉淀去糖一般都要放置过夜才能有较好的效果，所以最好还是用ctab。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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6楼2014-05-15 02:30:55
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撒的发生地方

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by jiangleiyu at 2014-05-15 02:30:55
沉淀不溶解是主要由于其中含有大量多糖，用30%乙醇沉淀去糖一般都要放置过夜才能有较好的效果，所以最好还是用ctab。

那加乙醇的先后次序有影响吗？我是在裂解液中加的。但是没出来，在最后一次氯仿抽提时加反而有条带，就是有条带那个。能帮我分一下么？

[ 发自小木虫客户端 ]
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7楼2014-05-15 09:04:35
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jiangleiyu

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

有影响的。如果在裂解之前将乙醇直接加在裂解液中，一般会极大的影响裂解效果，这主要是由于大部分提取高糖植物RNA的试剂盒主要成分为ctab，ctab是溶于乙醇的；如果是裂解完成后加乙醇，就没什么特别大的影响了。30%的乙醇沉淀多糖的效果其实很有限且耗时长，所以建议用LiCl代替异丙醇进行沉淀，这样能够很好的解决去糖的问题。我们实验室基本都是用的终浓度为4mol/L的LiCl常温沉淀1.5h，效果比较好，但是起始加样量要大一些哈。
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8楼2014-05-16 19:29:07
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撒的发生地方

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by jiangleiyu at 2014-05-16 19:29:07
有影响的。如果在裂解之前将乙醇直接加在裂解液中，一般会极大的影响裂解效果，这主要是由于大部分提取高糖植物RNA的试剂盒主要成分为ctab，ctab是溶于乙醇的；如果是裂解完成后加乙醇，就没什么特别大的影响了。30 ...

那我试试看吧，谢谢啊

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9楼2014-05-17 07:10:10
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