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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 一个表达方面的问题
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嘟嘟哒

金虫 (小有名气)

[求助] 一个表达方面的问题 已有2人参与

实验需要，自己设计合成了一段基因序列，其中一种密码子重复频率过高，现在表达没有结果，BL21的菌，pet28a质粒，ＩＰＴＧ浓度也从０．０５试到了１还是没有表达，请问是因为同一个密码子使用次数过多导致的么？有没有什么解决办法？
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1楼 2014-05-07 08:50:21
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meng_xu

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
嘟嘟哒(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-05-08 19:22:56
嘟嘟哒: 金币+5 2014-05-22 14:53:05
你的密码子是coli偏好的还是真核生物偏好的？如果是因为密码子偏好，可以尝试用BL21 Rosetta看看。

我最近也在用BL21表达，也有好多不表达的情况，也在一一尝试。
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2楼2014-05-08 02:09:34
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嘟嘟哒

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by meng_xu at 2014-05-08 02:09:34
你的密码子是coli偏好的还是真核生物偏好的？如果是因为密码子偏好，可以尝试用BL21 Rosetta看看。

我最近也在用BL21表达，也有好多不表达的情况，也在一一尝试。

ｃｏｌｉ偏好，当初设计的时候考虑到ＧＣ含量，就忽略了这个问题，也可能是同一个密码子使用频率太高，我现在也在做ｒｏｓｅｔｔａ
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3楼2014-05-09 09:12:57
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ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-06-05 10:11:46
在rosetta里试的有结果了没有呀？
我觉的应该还是没有结果吧，你这是重复序列太多了，在转录过程出现了问题。
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4楼2014-06-05 09:45:40
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youlinglyw

荣誉版主 (著名写手)

一匡天下

优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-06-05 10:12:03
强烈建议重新设计
这种密码子重复率过高，不管是什么菌，合成都是个问题，所以最终会导致不够用，然后就不表达了。

其实细菌表达，密码子偏好性不需要考虑太多，因为本身细菌就是高表达。
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天行健
5楼2014-06-05 10:06:48
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