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摘要:本实验根据已报道的PBoV的VP1基因序列设计并合成了一对寡核苷酸引物,在优化体外扩增条件的探索的基础上,成功地从猪博卡病毒3/4型(PBoV3/4)感染的细胞中扩增出**bp片段,将扩增片段克隆入pGEM-T载体后,转化到感受态大肠杆菌细胞中,增菌培养后提取质粒,进行一系列实验。.特异性试验结果表明该方法能够从PBoV3/4型阳性样品中特异性的扩增出209bp的片段,而对猪伪狂犬病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒、大肠杆菌、猪链球菌的核酸样品均无非特异性扩增反应;敏感性试验显示,该PCR方法对PBoV的最低检测量为**拷贝。本试验建立的PCR方法对PBoV3/4的检测具有简便、快速、灵敏度高和特异性强的特点。 关键词:猪博卡病毒3/4型,PCR方法,优化,检测 |
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