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2012csc至尊木虫 (知名作家)
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DH5α质粒的大量提取 已有2人参与
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最近在用QIAGEN的maxi kit大量提取质粒，p2 p3 QBT QC 都是自己按说明书上配制的，第一次提取质粒的浓度非常小原液浓度在0.18ug/ul左右，第二次第三次提取浓度很大但是跑电泳没有目的条带，只有一片弥散的亮处，是P2裂解时间长了使基因组的DNA全都被打断了？浓度很高，nanodrop2000测浓度在15ug/ul左右，OD260/OD280大于2.2，资料上说RNA多，但RNA怎么可能有那么多，我感觉还是基因组DNA几乎打碎成核苷酸了，不知道推测是不是对的，因为自己配的P2可能要比厂家的更烈性一些。还有就是OD260/OD280为什么大于2.0就是RNA污染？RNA为什么会使OD260增加？还有什么情况能使OD260增加？加完P2后多久加P3？都说不超过5分钟，怎么判断裂解是否充分？上下颠倒几下，跟加完P1比稍微澄清一些就可以加P3了吧？如图，第二道就是第二次提取的，不知道是怎么回事~ cc 4 21（2）.jpg |
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