应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 荧光定量PCR阴性对照P出了目的条带
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 3388  |  回复: 14
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

摩羯的心

铁虫 (小有名气)

[求助] 荧光定量PCR阴性对照P出了目的条带 已有3人参与

各位虫友，我做绝对定量，以质粒为模板，设置了阴性对照，CT值与样品的很接近，跑电泳结果竟然有目的条带，这是怎么回事啊？因为我引物的特殊性是要区分基因突变型，因此引物中引入了错配碱基，所以做PCR的酶必须不具有3'-5'外切酶活性，现在用的是伯乐的盒子，适合iQ5机型，大家给推荐比较好用的做荧光定量的试剂盒吧？还有有没有人用普通PCR试剂，只是里面加入荧光染料，做荧光定量的，这样可行吗？大家帮帮忙吧  实验遇见瓶颈了
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-04-26 10:22:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

摩羯的心

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zhangyunjing at 2014-04-28 11:54:17
按照这种情况的话，很有可能是气溶胶污染了，也就是环境污染了，换个实验环境试试。荧光定量法进行基因突变检测时，染料法需要采用饱和染料，比如EvaGreen，探针法就无需加入荧光染料了

实验室里为什么就会有气溶胶污染了呢 而且 我换了个环境做的结果是一样的呢  阴性对照还是跟样品的ct值很接近  染料必须用EvaGreen 吗 我用的是sybr Green 伯乐的试剂盒
赞一下 回复此楼
5楼2014-04-28 15:44:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答

yb19841014

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
摩羯的心(kx444555代发): 金币+2, 鼓励交流 2014-04-29 08:40:14
把试剂，引物，模板重新换新的吧  估计是被污染了啊  我们实验室现在用的是vazyme的 Qmix  还不错
赞一下 回复此楼
2楼2014-04-27 21:56:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

摩羯的心

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yb19841014 at 2014-04-27 21:56:29
把试剂，引物，模板重新换新的吧  估计是被污染了啊  我们实验室现在用的是vazyme的 Qmix  还不错

我把引物 模板都换成新的了 还是如此啊  而且试剂 也是刚开始用的
赞一下 回复此楼
3楼2014-04-28 08:22:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangyunjing

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-04-29 08:40:18
按照这种情况的话，很有可能是气溶胶污染了，也就是环境污染了，换个实验环境试试。荧光定量法进行基因突变检测时，染料法需要采用饱和染料，比如EvaGreen，探针法就无需加入荧光染料了
赞一下 回复此楼
rainwater
4楼2014-04-28 11:54:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085601材料工程找调剂 +16 oatmealR 2026-03-29 17/850 2026-03-30 11:04 by w虫虫123
[考研] 085600材料与化工调剂 +6 kikiki7 2026-03-30 6/300 2026-03-30 10:57 by 星空星月
[考研] 0703一志愿9，初试成绩：338，四六级已过，有科研经历，求调剂！ +5 Zuhui0306 2026-03-25 5/250 2026-03-30 10:27 by herarysara
[考研] 317求调剂 +10 蛋黄咸肉粽 2026-03-26 10/500 2026-03-30 09:45 by longlotian
[考研] 275求调剂 +15 Micky11223 2026-03-25 20/1000 2026-03-29 20:44 by 唐沐儿
[考研] 340求调剂 +6 Amber00 2026-03-26 6/300 2026-03-29 12:06 by 无际的草原
[考研] 085600，专业课化工原理，321分求调剂 +5 大馋小子 2026-03-28 5/250 2026-03-29 08:56 by qingfeng258
[考研] 数一英一271专硕（085401）求调剂，可跨 +7 前行必有光 2026-03-28 8/400 2026-03-28 23:22 by 小木虫tim
[考研] 283求调剂 +7 A child 2026-03-28 7/350 2026-03-28 12:05 by zllcz
[考研] 339求调剂，想调回江苏 +6 烤麦芽 2026-03-27 8/400 2026-03-28 10:40 by 烤麦芽
[考研] 286求调剂 +4 丢掉懒惰 2026-03-27 7/350 2026-03-28 08:07 by baoball
[考研] 材料求调剂 一志愿哈工大总分298分，前三科223分 +5 dongfang59 2026-03-27 5/250 2026-03-28 04:53 by wxiongid
[考研] 295求调剂 +5 1428151015 2026-03-27 6/300 2026-03-28 04:04 by fmesaito
[考研] 085601 材料工程 313分 求调剂 +5 Ong3 2026-03-27 5/250 2026-03-27 12:24 by goldfish51
[考研] 一志愿郑大085600，310分求调剂 +5 李潇可 2026-03-26 5/250 2026-03-27 11:14 by 不吃魚的貓
[考研] 一志愿吉大071010，316分求调剂 +3 xgbiknn 2026-03-27 3/150 2026-03-27 10:36 by guoweigw
[硕博家园] 北京林业大学硕导招生广告 +6 kongweilin 2026-03-26 8/400 2026-03-27 10:18 by FF_16
[考研] 324求调剂 +8 hanamiko 2026-03-26 10/500 2026-03-27 08:06 by hypershenger
[考研] 材料专硕找调剂 +5 哈哈哈吼吼吼哈 2026-03-23 5/250 2026-03-24 19:07 by 了了了了。。
[考研] 277分求调剂，跨调材料 +3 考研调剂lxh 2026-03-24 3/150 2026-03-24 13:52 by JourneyLucky
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭