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3‘RACE序列比对了居然是26S核糖体RNA基因 这是怎么回事 求指点 ！！！！！万分感谢 已有4人参与
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应用CloneTech Smart RACE试剂盒做3’RACE 应用试剂盒的UPM引物基因特异性引物 退火58度 延伸2min 得到了750bp 和300bp 的条带 测序 结果都是26S核糖体RNA基因 ，不是我要的基因序列 请问我到底哪里出了错？ |
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4楼2014-04-23 16:34:30
biostar2009
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仔细分析你得到的序列，你找到了非模板A么？ 看看这个： http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=7194592 |
2楼2014-04-23 16:01:45
Neo2000
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3楼2014-04-23 16:05:34
karin
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我最近也在用CloneTech Smart RACE试剂盒做5’RACE ，换了若干引物，用的touch-down PCR，测了若干2kb、1kb、750bp、500bp条带，都是核糖体28s，18s，5.8s基因簇里的片段。后来我拿自己的基因和这个基因簇对比了一下，确实有相似度高的部分，后来就选择相似度低的部分设计特异引物，目前正在做，反正不再出以前那些明显不对的条带了。 你可以也比对一下，是不是和我的情况类似呢，还有就是设计特引物的时候选择Tm值高的，以便做touch-down PCR。当参考吧，祝你早日成功！  |
5楼2014-04-24 11:11:33
